2015春第七章酶的非水相催化tostudents.pptVIP

2.2 对映体选择性 对映体选择性：酶在对称的外消旋化合物中识别一种异构体的能力。也叫立体异构专一性。 立体选择系数KLD：表示对映体选择性的大小 Km：米氏常数 Kcat：酶的转换数 2.2 对映体选择性 立体选择系数越偏离 1，酶催化的对映体选择性越强。 酶在水溶液中催化的对映体选择性较强，而在疏水性强的有机介质中对映体选择性较差。 所以，增加水含量能提高对映体选择性。 2.2 对映体选择性 意义：手性药物的合成 例如，某些蛋白酶在水溶液中对 L-氨基酸起作用，而在有机介质中可用 D-氨基酸为底物合成手性药物。 2.4 键选择性 键选择性：同一个底物分子中有两种以上化学键可与酶反应，酶对其中一种优先反应。 例：6- 氨基-1-己醇的选择性酰基化 2.有机溶剂的选择 有机溶剂的极性：疏水性参数 lgP lgP↓，疏水性↓ ，极性↑；有机溶剂越容易抢夺结合水、破坏水化层 lgP↑ ，极性↓ ；疏水性底物难溶于有机溶剂，反应难以进行 一般选择 2 ≤ lgP ≤ 5 的有机溶剂 3. 水含量的控制 最适水含量——通过实验确定 4. 温度的控制 最适温度 有机介质的最适温度 高于水中的最适温度（水含量变小，热稳定增强） 通过实验确定 温度↑，立体选择性↓ 5. pH值的控制 pH印记现象 酶在冷冻干燥过程中，pH 状态发生变化。因此，要加冷冻干燥保护剂 可在有机介质中加入有机相缓冲液调节反应时的 pH 值 Klibanov：酶在有机溶剂中活力低的原因及其解决 （1）合成反应 水解酶在有机介质中能催化水解的逆反应，即合成反应（why？） 例：假单胞菌脂肪酶 （1）合成反应 蛋白酶在有机介质中能催化多肽的合成 （2）转移反应 酯交换反应（转酯反应） 例：猪胰脂肪酶对外消旋体的拆分： （3）醇解反应 醇解反应：酰卤、酸酐、酯等被醇分解，生成酯和其他化合物的反应 例：假单胞脂肪酶催化酸酐醇解生成二酸单酯化合物 （4）氨解反应 脂肪酶催化酯类转变成胺类 （5）异构反应 D-ACL（D-3-amino-2-?-caprolactam）的异构化 （6）氧化还原反应 羰基的还原反应 （7）裂合反应/加成反应 羰基的加成反应 酶非水相催化的应用 脂肪酶的非水相生物催化 短链脂肪酸酯 短链脂肪酸酯，是一大类十分重要的香味剂，具有多种天然水果的香味。中国，短链脂肪酸酯每年的产量为几千吨，己酸乙酯和丁酸乙酯，在国内酿造业的需求分别是3000 t/a t/a，1000 t/a。食品中常用的乙酸乙酯（白酒、白兰地，还常用于冰激凌、糖果、面包等食品中），3000 t/a。我国在食品、饮料和医药工业中每年使用价值上亿元的芳香酯。 缺点：国际上化学法生产丁酸乙酯产品价格仅为2-5美元/kg，生物催化法价格180美元/kg。 微生物脂肪酶 根霉属是微生物是脂肪酶的重要生产菌，分离得到超过30种脂肪酶，已被制成商品化酶制剂，德列马根霉、华根霉、米根霉、无根根霉、黑根霉、日本根霉、雪白根霉。 不同来源的脂肪酶在选择性上有所不同，来自根霉的脂肪酶大多具有高度的1、3位置专一性。 应用：芳香酯、生物柴油、手性化合物 脂肪酶产生菌筛选： 三丁酸甘油酯或吐温-80为底物的透明圈法；在橄榄油琼脂平板加入罗丹明B的荧光圈法。如Torres等人以三丁酸甘油酯平板为初筛、在异辛烷中催化合成油酸丙酯的能力为复筛。 从酿造浓香型大曲酒的酒曲中筛选到一株华根霉，全细胞脂肪酶在庚烷中催化合成己酸乙酯的转化率较高，并适用于催化其他短链芳香酯的合成。 生产工艺 碳源：葡萄糖常对产酶有抑制作用，常用脂肪酸和脂类物质，除了作为碳源外，还可作为产脂肪酶的诱导剂。少根根霉产脂肪酶受玉米油诱导。 氮源：米根霉脂肪酶，蛋白胨适用于胞外酶的产生，胰蛋白胨有利于胞内酶的产生。 发酵条件：除了pH、温度，氧起到重要的作用，氧传递速率比溶解氧影响更大。在菌体量相同的情况下，改善通风、增强搅拌等提高氧传递速率，提高酶活。 正己烷反应体系，极性中等，转化率最高。 手性药物拆分 生物柴油的生产方法 目前生物柴油主要是用化学法生产，成本低。但在反应过程中使用过量的醇，而使后处理过程变得较为繁杂。能耗高；色泽深，在高温下容易变质；酯化产物难于回收；生产过程有废碱液排放。 生物酶法：条件温和，醇用量小、无污染排放。缺点：对甲醇及乙醇的转化率低，一般仅为40%～60%，酶的使用寿命短。副产物甘油和水难于回收，不但对产物形成抑制，而且甘油对固定化酶有毒性，使固定化酶使用寿命短。 2.1 手性药物的拆分 手性（chirality)化合物是指化学组成相同，而其立体结构互为对映体的两种异构体化合物。 目前世界上化学合成药物中的40%左右属于手性药物。 手性（chirality）化合物