基因工程的原理.pptVIP

第一节 基因工程的原理 基因工程的概念 转基因抗虫棉 问题探讨： 　　　苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。 　　　让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。 想一想需要哪些工具呢？ 　 1、目的基因： 基因表达载体的构建——核心 质粒 DNA分子 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA 连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 限制酶 目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。 二、重组载体的构建 二、重组载体的构建 基因表达载体的组成： b、目的基因 a、启动子 c、终止子 d、标记基因 e、复制原点 1、1997年，科学家将动物体内的能够合成胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组，并且在大肠杆菌中表达成功。请据右下图回答问题。 (1)此图表示的是采取__________合成基因的方法获取__________基因的过程。 (2) 图中①DNA是以为_________ 模板，形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的目的基因。 (3) 图中③代表 ，它往往含 　基因，以便对目的基因的检测。 人工 目的 信使RNA 重组DNA分子 标记 植物受精卵 植物体细胞 动物受精卵 微生物细胞 受体细胞 花粉管通道法、基因枪法 农杆菌转化法、基因枪法 显微注射法 Ca 处理法 导入方法 转化 —— 目的基因导入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 三、重组载体的导入和筛选 2+ 大肠杆菌细胞最常用的转化方法是: （1）将细菌用CaCl2处理，以增大细菌细胞壁的通透性。 （2）使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。 （3）目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。 农杆菌介转化法 （导入植物体细胞） 花粉管通道法 （导入植物受精卵） 显微注射法 （导入动物受精卵） * 乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷) 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因拼接技术或DNA重组技术 基因工程的别名 基因工程是指按照人们的愿望，将一种生物的基因在体外剪切，并与特殊的运载工具进行拼接，然后导入另一种生物体内进行扩增，并使之表达产生所需蛋白质的技术。定向的改造生物的遗传性状。 DNA重组技术或基因拼接技术 生物体外 基因 DNA分子水平 剪切→拼接→导入→表达 定向的改造了生物的性状 _________________的培育成功，宣告了基因工程的诞生。 双重抗性大肠杆菌 抗虫棉 普通棉 苏云金芽孢杆菌 毒蛋白 普通棉花　　抗虫棉 一、 基因手术刀：限制性内切酶 二、基因缝纫针：DNA连接酶 三、基因运输车：载体 探究1：基因工程的基本工具是什么？ （1）识别特定的脱氧核苷酸序列（回文序列）；（2）并在特异性位点把双链DNA分子“切割”开。 主要从原核生物中分离纯化 一、 基因手术刀：限制性内切酶 1、来源： 2、功能： 3、酶切结果： 形成黏性末端。 4、作用实质： 特定部位的磷酸二酯键（酶切位点）断开 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 识别特定的脱氧核苷酸序列的特点：中轴线两侧的碱基反向对称重复排列的回文序列。 切割的位点：G、A之间 断裂的化学键是：磷酸二酯键 限制性内切酶对DNA分子的切割 A A G C T T T T C G A A A A G C T T T T C G A A DNA A B C D DNA HindⅢ HindⅢ切割位点 A B 限制酶作用是A处还是B处？ A处 T 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A 思考： 某DNA分子被限制性内切酶Ⅰ切后形成1个DNA片段，有1000个碱基对，该DNA分子若被限制性内切酶Ⅱ切后形成2个DNA片段，分别有600个碱基对和400个碱基对，若该DNA分子同时被限制性内切酶Ⅰ和Ⅱ切割后形成2种DNA片段，分别有600个碱基对和200个碱基对。 问：该DNA分子有何特点？限制性内切酶Ⅰ有几个酶切位点？限制性内切酶Ⅱ有几个酶切位点？ 该DNA为环状 1个 2个 GAATTC CTTAAG GAATTC CTTAAG G AATTC CTTAA G G AATTC CTTAA G G CTTAA AATTC G 双链断开 不同来源的DNA片段结合 1、种类： E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 磷酸二酯键 二、基因缝纫针：DNA连接酶 2