植物组织的培养方法.docx

植物组织的培养方法 　　1、非试管微组织快繁 　　非试管微组织快繁技术是将外植体（一般要求带一叶一芽）放置在室内外普通沙子培养基上进行培养，利用植物腋芽自然倍增达到快速繁殖的目的。一般植物7～15天可以生长出根系。此技术投资低，操作环节少。 　　2、试管组织培养 　　试管组织培养是将外植体（即离体组织、器官或细胞）放置在试管等器皿中在无菌的条件下进行组织培养获得试管苗。  HYPERLINK /view/157870.htm 编辑本段 植物组织培养的优点 　　1、占用空间小，不受地区、季节限制。 　　2、培养脱毒作物 　　3、培养周期短 　　4、可用组培中的愈伤组织制取特殊的生化制品 　　5、可短时间大量繁殖，用于拯救濒危植物 　　6、可诱导之分化成需要的器官，如根和芽 　　7、解决有些植物产种子少或无的难题， 　　8、不存在变异，可保持原母本的一切遗传特征 　　9、投资少，经济效益高 　　10、繁殖方式多，试用品种多  HYPERLINK /view/157870.htm 编辑本段 植物组织培养一般分为以下几种 　　1、 HYPERLINK /view/1346634.htm \t _blank 胚胎培养 　　指以从胚珠中分离出来的成熟或未成熟胚为 HYPERLINK /view/415097.htm \t _blank 外植体的离体无菌培养。 　　2、器官培养 　　指以植物的根、茎、叶、花、果等器官为外植体的离体无菌培养，如根的根尖和切段，茎的茎尖、茎节和切段，叶的叶原基、叶片、叶柄、叶鞘和子叶，花器的花瓣、雄蕊（花药、花丝）、胚珠、子房、果实等的离体无菌培养。 　　3、组织培养 　　指以分离出植物各部位的组织（如分生组织、形成层、木质部、韧皮部、表皮、皮层、胚乳组织、薄壁组织、髓部等），或已诱导的愈伤组织为外植体的离体无菌培养。这是狭义的植物组织培养。 　　4、 HYPERLINK /view/44478.htm \t _blank 细胞培养 　　指以单个游离细胞（如用果酸酶从组织中分离的体细胞，或花粉细胞，卵细胞）为接种体的离体无菌培养。 　　5、原生质体培养。 　　指以除去细胞壁的原生质体为外植体的离体无菌培养。  HYPERLINK /view/157870.htm 编辑本段 培养材料的采集 　　要根据培养目的适当选取材料，选择原则：易于诱导、带菌少。要选取植物组织内部无菌的材料。这一方面要从健壮的植株上取材料，不要取有伤口的或有病虫的材料。另一方面要在晴天，最好是中午或下午取材料，决不要在雨天、阴天或露水未干时取材料。因为健壮的植株和晴天光合呼吸旺盛的组织，有自身消毒作用，这种组织一般是无菌的。培养材料的消毒 　　从外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带有各种微生物。这些污染源一旦带人培养基，便会造成培养基污染。因此，植物材料必须经严格的表面灭菌处理，再经无菌操作手续接到培养基上。 　　试剂 　　? 乙醇。 　　? 吲哚乙酸（ IAA） 或 2 ，4 – D （生长素类似物）。 　　? 氯化汞（升汞）或次氯酸钠。 　　? 6- 苄基氨基腺嘌呤（ 6-BA ） 　　? MS 培养基 　　? 0.1 mol/L NaOH与 0.1 mol/L HCl 　　配制培养基 　　（ 1 ）愈伤组织诱导培养基： MS 培养基（蔗糖含量为 10 g/L ， 2,4 – D 含量为 2 mg/L ，琼脂 10 g/L ）。 　　（ 2 ）试验培养基：在 MS 培养基中加入 IAA 和 6–BA 。 　　吲哚乙酸（IAA)先用少量 0.1 mol/L NaOH 溶解， 6- 苄基氨基腺嘌呤先用少量 0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸馏水稀释，再加入培养基中。 　　仪器设备 　　培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（ 100mL ），烧杯，量筒，培养皿，棉线，接种箱或超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，容量瓶，移液管，牛皮纸。 　　培养基灭菌 　　将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至 pH 5.8 ，趁热分装于 100 mL 三角烧瓶中，每瓶约 20 mL 。待培养基冷却凝固后，用一层称量纸和一层牛皮纸包扎瓶（管）口，并用棉线扎牢，然后在高压灭菌锅中 121 ℃（ 1 kg/cm 2 ）下灭菌 20 min 。取出三角烧瓶放在台子上，冷却后备用。接种操作所需的一切用具（如长镊子、解剖刀、剪刀等）及灭菌水，需同时灭菌。  HYPERLINK /view/157870.htm 编辑本段 植物组织培养步骤 　　第一步，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗。把材料