正交试验设计优化杜仲总木脂素提取工艺.doc

正交试验设计优化杜仲总木脂素提取工艺 作者 单位 邓翀 陕西中医学院,陕西成阳,712046 颜永刚 陕西中医学院,陕西成阳,712046 杨乖利 陕西中医学院,陕西成阳,712046 陈锐 陕西中医学院,陕西成阳,712046 杜仲为杜仲科植物杜仲(Eucommia ulmoides Oliver)的干燥茎皮,特产于我国西部、西南部及长江中上游地区。《神农本草经》将杜仲列为上品,功效补中益精气、强筋骨、强志、安胎,久服轻身耐老。主要用于治疗肾虚腰痛、筋骨无力、妊娠漏血、胎动不安、高血压症。木脂素类化合物是杜仲化学成分中研究最多、结构最清晰、成分最明确的一类化合物,有关杜仲中木脂素类化合物的报道很多[1-3]。木脂素类成分是杜仲降压的主要组分[4]。但对其主要降压成分群木脂素提取工艺鲜有报道,本试验就杜仲木脂素的提取工艺进行研究,为杜仲木脂素成分分离纯化提供参考。 1 仪器与试药 UV-1102紫外分光光度仪(上海天美科学仪器有限公司),中兴高速万能粉碎机(北京中兴伟业仪器有限公司制造), GV-1102电子天平(武汉红旗光学仪器厂),萨多利斯GB2042电子天平(瑞典,0.01 mg),天平(济南市医疗器械厂)。 杜仲药材(市售品,经本院生药教研室王继涛老师鉴定为杜仲);松脂醇二葡萄糖苷(批号111537-200502)由中国生物制品检定所提供;水为蒸馏水;其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 含量测定方法 2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取松脂醇二葡萄糖苷对照品4.43 mg置于25 mL的量瓶中,用甲醇溶解,定容至刻度,配制成浓度为0.177 2 mg/mL的对照品溶液。 2.1.2 供试品制备方法 精密称取杜仲药材粉末(60目筛)约5 g,以适当的溶剂为提取溶媒,按照试验设计的方法进行提取,滤过,提取液在80 ℃水浴浓缩,挥干溶媒,以80%甲醇溶解,定容于50 mL量瓶中。储存于4 ℃,冷藏待用。 2.1.3 标准曲线的绘制 精密吸取对照品溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL,分别置于10 mL的具塞试管中,挥干溶媒。分别加入0.5 mL 10%的变色酸、3 mL浓硫酸、1.5 mL蒸馏水,摇匀后沸水浴加热30 min,迅速冷却。以空白溶液为对照,在570 nm处测定吸光度,平行测定5次。得到标准曲线Y=0.178 2X+0.000 9,r=0.999 7,结果表明,对照品松脂醇二葡萄糖苷在0.035 4～0.124 0 mg范围内线性关系良好。 2.1.4 精密度试验 精密吸取松脂醇二葡萄糖苷对照品溶液0.4 mL置于10 mL具塞试管中,按“2.1.3”项下方法测定,连续5次重复测定。结果表明精密度良好,RSD=0.329%。 2.1.5 稳定性试验 精密吸取松脂醇二葡萄糖苷对照品溶液0.4 mL置于10 mL的具塞试管中,按“2.1.2”项下方法测定, 分别于0、10、20、30、40 min时间点测定吸光度。计算得RSD=1.641%。结果表明,松脂醇二葡萄糖苷对照品稳定性较好。 2.1.6 加样回收率试验 取已知含量的样品6份,每份1 g,精密加入一定量松脂醇二葡萄糖苷对照品溶液,以正交试验设计5号样品制备方法,照“2.1.2”项下方法制备供试品溶液,按“2.1.3”项下方法测定平行测定6份样本。结果表明,松脂醇二葡萄糖苷回收率为102.273 9%±3.211 8%,RSD=3.14%。 2.2 总木脂素提取工艺考察 2.2.1 单因素考察 提取溶媒考察 精密称取杜仲药材粉末约5 g,分别以甲醇、乙醇为提取溶媒,溶媒用量为8倍,超声30 min,滤过,以相应溶媒定容于25 mL量瓶中,精密吸取药液0.4 mL,按“2.1.3”项下方法测定吸光度,以标准曲线法计算含量,结果以甲醇为溶媒时提取率较高。 提取方法考察 精密称取杜仲药材粉末约5 g,以甲醇为提取溶媒,溶媒用量为8倍,分别超声和回流30 min,滤过,以相应溶媒定容于25 mL量瓶中,精密吸取药液0.4 mL,按“2.1.3”项下方法测定吸光度,以标准曲线法计算含量,结果以超声提取时提取率较高。 甲醇浓度考察 精密称取杜仲药材粉末约5 g,分别以40%、60%、70%、80%、100%甲醇为提取溶媒,溶媒用量为8倍,超声30 min,滤过,以相应溶媒定容于25 mL量瓶中,精密吸取药液0.4 mL,按“2.1.3