流式抗体的选择和搭配荧光素的选择.doc

流式抗体的选择 第一、 选择流式抗体要看清楚抗的是你的目标蛋白质，目标蛋白的物种不要搞错了，有些抗体对好几个物种的目标蛋白有反应，重要的是对你的实验有没有影响。 第二、 抗体的物种是小鼠大鼠兔子还是什么。以备不时之需，最好还是选择你有匹配二抗。如果抗体还能够做荧光染色啊，western blot用途多了更好。 第三、 选择流式抗体还要看荧光的颜色的选择：一是你的流式仪一定要能读，二是跟你需要counterstain的其他流式抗体错开频率。 第四、 抗体的球蛋白亚型。因为要根据这个选择isotype对照用抗体。每个抗体分子携带的荧光分子数量也要一样才行。最好是一个isotype你的好几个抗体都能用，就省事了。 第五、 到底能测试多少样品。有些产品介绍没说清楚，可以根据推荐的浓度计算一下。一是这样才看出价格高低，二是根据自己需要选择大支还是小支.买多了过期也是浪费。 另外，选择流式抗体时还可以看制作抗体所用的抗原是什么，有的是肿瘤组织提取液，有的是重组蛋白，有的是肽链片断。选用哪个跟你的实验用途有关。有些蛋白质有很多亚型，也要注意是否测试过跟那些亚型起反应。 流式抗体搭配流式荧光素主要有2个原则： 第一，每个通道只能选择1种荧光素。 第二，各个通道之间的荧光素可以随意搭配，因此需要注意： 1、流式抗体每个通道只能选择1种荧光素。以Calibur为例说明，Calibur的FL1通道选择了Alexa Fluro488就不能选FITC ，或者选择了FITC就不能选择AlexaFluro488。Calibur的FL3通道尽管能检测PE-Texas RedPE-Cy5，PerCP，PerCP-Cy5.5，PE-Cy7五个荧光素，但是我们搭配的时候只能选择其中1个。 2、各个通道之间的荧光素可以随意搭配：如果客户的流式细胞仪能做4个通道，在第1个原则之下，那么每个通道随便选出1个荧光素就可以组合成4个颜色。以2跟激光的Calibur为例，Calibur各个荧光素之间可以搭配出16种组合。比如常用的搭配是F I T C( F L 1 )＋P E(F L2)＋PerCP(FL3)+APC(FL4)这个搭配组合可以更改成Alex Fluro(FL1)＋PE(FL2)＋PerCP(FL3)+APC(FL4)或者FITC(FL1)＋PE(FL2)＋PerCP(FL3)+Alex Fluro(FL4)或者FITC(FL1)＋PE(FL2)＋PE-Cy5(FL3)+APC(FL4)等等。总之，在第1原则之下，我们可以随意搭配和组合各个荧光素。但是需要注意的是，APC和PE-Cy5一起使用的话，上流式以后，容易导致补偿过度。