流式细胞术在白血病免疫分型中的临床应用.doc

流式细胞术在白血病免疫分型中的临床应用 用流式细胞术进行白血病免疫分型，其抗体组合的多少要根据分析目的和对疾病所表达的特异性标记来确定。如果检测的目的仅为得出论断结论，则只需要选用急性淋巴细胞白血病或与慢性淋巴细胞白血病相关特异性抗体组合便可诊断出多数病例。理想状态是在标本管中分别加入2种或3种不同标记的抗体，另需在每管中加入一不同标记的设门抗体用来衡定分析某一群细胞。 (一)急性白血病 只有少数抗体可被认为有细胞系别特异性，且都是胞质内染色，它们是：粒系胞质内MPO，B细胞系胞质内CD22和T细胞系胞质内CD3。现在MPO与CD3或CD22双标试剂已商业化，可直接购买试剂盒。在诊断急性白血病(ALL)过程中，必须将细胞固定后检测以上指标。实验表明，Fix和Perm固定破膜剂在检测以上指标(MPO，CD22，CD3，TdT，κ/λ免疫球蛋白轻链，和μ重链)时所得结果最为可靠。用固定破膜剂检测胞质内抗原适用于以下情况： (1)不表达细胞系别特异性抗原，但细胞表达了通常可确诊的抗原。举例说明，当病例为MPO阴性的急性白血病时，细胞可同时表达3种粒系抗原：CD33、CD13和CD65s，这些指标都提示病例为粒系白血病(AML)。但要注意的是，在一些ALL病例中也会出现CD33、CD13和CD15，但缺失表达CD65s的情况。在MPO阴性患者中表达CD117也支持AML诊断，因为ALLCD117表达的情况十分罕见。对于MPO阴性的病例还要注意是否伴红细胞白血病或巨核细胞白血病的可能性。CD34、HLA-DR或TdT这些标志物不具有系别特异性，它们通常被用来评估细胞的成熟度。在此必须注意的是如运用破膜剂来检测AML病例的TdT的表达，必须使用直接荧光标记的TdT抗体来检测。 (2)CD11b和CD24在检测粒细胞成熟度方面非常有用。正常人的单核细胞系或单核系白血病细胞(通常CD14+)或AML细胞(CD11b+AML，通常CD14-)一般表达CD11b+/HLA-DR+。粒系细胞的成熟度，如：骨髓中的中幼粒细胞、晚幼粒细胞、早幼粒细胞外周血中的成熟粒细胞通常可通过CD11b阳性且HLA-DR阴性情况来加以区分。在早幼粒细胞白血病中，HLA-DR和CD34阳性的肿瘤细胞如不表达CD11b，则表明细胞比较幼稚且CD24也为阴性。CD24表达于绝大多数的正常粒细胞，包括早幼粒细胞，而在ALL细胞或早幼粒细胞白血病细胞上不表达。正常或异常的单核细胞都表达相同的CD24。 (3)有些病例的标本量有限，这时可采用只有系别特异抗体和其他一些重要标志的精减分型方案来进行分析。比如对于精减过的B淋巴系ALL甚少要包括CD10和胞质内这两个具有预后意义的重要指标;精减过的AML分型方案则要包括CD11a作为区分APL(阴性)与NK样AML的有效指标。 (4)KOR-SA3544抗原检测的临床意义：在正常人外周血中仅表达于粒细胞表面，在淋巴细胞、红细胞、血小板上不表达。在ALL中，KOR-SA3544单克隆抗体主要在Ph阳性ALL患者中有反应，在培养的细胞系中，KOR-SA3544与Ph阳性ALL细胞系反应(5/5)，及11q23易位的白血病细胞系(3/11)反应。在淋巴细胞白血病中，KOR-SA3544在所有Ph阳性ALL患者中有反应(26/26)，与部分普通ALL反应(5/38)，1例11q23易位的早前B-ALL反应，但不与外周血淋巴细胞反应。正常成熟的粒细胞也强表达KOR-SA3544抗原。在粒细胞白血病中，KOR-SA3544仅在FAB-M2中有部分表达(16/56)，在明显的MDS转变来的白血病中也有表达。除此之外，KOR-SA3544既不在其他类型白血病中表达，也不在慢性粒细胞白血病(CLL)急变时表达。KOR-SA3544识别白血病细胞系膜上1个分子量为90000的抗原，KOPN-57bi。在正常骨髓中没有发现CD19+KORSA3544+细胞，而Ph阳性ALL对两种抗体的反应非常强。KOR-SA3544的应用，不仅用于诊断Ph阳性ALL，也可用于检测缓解期微小残留病。 (二)慢性白血病 对于CLL，分型的主要目的是区分T淋巴系和B淋巴系。其次要检测B淋巴系细胞是否表达表面免疫球蛋白轻链，可通过B淋巴系特异性抗原CD19与κ和λ轻链抗体来检测;但在检测中需注意要去除由细胞与血浆的免疫球蛋白结合的非特异性染色。对慢性髓细胞白血病，免疫分型可及时发现处于慢性期的异常细胞。因为大部分幼稚细胞CD34阳性，故建议对于慢性期患者运用CD34作为设门单抗进行检测。当出现原始细胞危象时，则需运用急性白血病分型方案来分型。 如果要研究新白血病亚型或有预后价值的标志物，可采用更为