甲状腺肿瘤检测Bcl2的意义.doc

甲状腺肿瘤检测Bcl-2的意义 来源：中国论文下载中心 作者：熊少伟 王玲 雷云鹏 编辑：studa1211 　【摘要】 目的 探讨Bcl-2的表达与甲状腺癌的发生、发展及预后的关系。方法 应用免疫组化方法，以单克隆抗体鼠抗人Bcl-2标记77例甲状腺癌、58例甲状腺腺瘤、40例癌旁甲状腺组织和28例正常甲状腺组织。观察不同甲状腺组织中Bcl-2的表达，并比较其阳性率。结果 Bcl-2阳性反应见于甲状腺癌、甲状腺腺瘤及癌旁甲状腺组织。在甲状腺癌组织中Bcl-2阳性率为45.5％，高于甲状腺腺瘤组织(22.4％)(P=0．006)、癌旁甲状腺组织(17.5％)(P=0．003)和正常甲状腺组织(0)(P=0．000)。甲状腺未分化癌和滤泡状癌组织中Bcl-2的阳性率明显增高。存在淋巴结转移和临床Ⅲ、Ⅳ期病例中，Bcl-2的阳性率明显增高。结论 Bcl-2过量表达可能与甲状腺肿瘤的发生有关，癌组织中Bcl-2的表达可作为甲状腺癌预后的参考指标。 　　【关键词】 甲状腺肿瘤；Bcl-2基因；原癌基因；基因表达；免疫组化 　 甲状腺癌是常见的内分泌肿瘤，女性发病率高。临床甲状腺肿瘤中有5％~10％为甲状腺癌［1］。其中分化型甲状腺癌占90％，包括甲状腺乳头状癌和甲状腺滤泡状癌，未分化癌较为少见，其恶性程度高、预后差。国内资料显示我国甲状腺癌的发病率在明显增加［2］。近年来，甲状腺癌的相关基因和肿瘤标志物研究进展很快。研究证实［3,4］，Bcl-2基因是一种细胞凋亡抑制基因，最早发现于滤泡性B细胞性淋巴瘤中，其产物Bcl-2蛋白可抑制细胞凋亡，延长细胞生存期。本研究采用免疫组化技术，通过检测Bcl-2在甲状腺癌组织、甲状腺腺瘤组织、甲状腺癌旁组织及正常甲状腺组织中的表达水平，探讨Bcl-2在甲状腺癌组织中的发生发展过程中的作用，以揭示Bcl-2与甲状腺癌的生物学行为的关系及其预后关系。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　全部标本取自北京大学深圳医院普通外科2001年至2009年间手术治疗的甲状腺病例标本，其中：甲状腺癌77例(男28例，女8例，平均50岁)，58例甲状腺腺瘤(男22例，女36例，平均36岁)，同时取癌旁甲状腺组织40例(男10例，女30例，平均37岁，经病理检查确诊均无甲状腺癌浸润)；取正常甲状腺组织28例(男9例，女l9例，平均35岁)。对77例甲状腺癌按WHO标准组织学分类：乳头状癌55例，滤泡状癌l4例，未分化癌8例，按AJCC标准临床病理分期：I期30例，Ⅱ期23例，Ⅲ 期16例，Ⅳ期8例；其中，有淋巴结转移者33例，无淋巴结转移者44例。标本经10％ 福尔马林液固定、石蜡包埋，常规切片，60℃烤片2 h，37℃过夜备用。 　　1.2 免疫组化试剂 　　Bcl-2鼠抗人单克隆抗体，为美国ZYMED公司产品。SP-9000通用型试剂盒为美国ZYMED公司产品。用已知Bcl-2阳性的扁桃体作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性空白对照。 　　1.3 试验方法 　　切片脱蜡水化后，3％H2O2室温处理15 min，微波抗原修复，正常山羊血清室温孵育30 min，滴加一抗，4℃冰箱孵育过夜。滴加生物素标志的二抗，室温孵育30 min，滴加辣根过氧化酶标记的链亲和素室温30 min，DAB显色。经苏木精复染后，脱水、透明、封片。 　　1.4 判断标准 Bcl-2定位于细胞膜及细胞质，以细胞膜及细胞质内出现黄色至深棕黄色颗粒为阳性细胞。无阳性细胞为Bcl-2阴性；有阳性细胞为Bcl-2阳性。所有标本均由两位病理医师采用盲法阅片，结果不一致时协调统一判断最终结果。 　　1.5 统计学分析 　　所有数据采用SPSS 13.0统计软件包在电脑上进行统计分析，进行χ.2检验，以P≤0.05为差异有统计学意义。 　　 　　2 结果 　　2.1 Bcl-2在不同甲状腺组织中的表达情况,见表1。 　　光镜下Bcl-2阳性反应表现为细胞膜及细胞质染成棕褐色，未见棕褐色颗粒为阴性。Bcl-2阳性率在甲状腺癌为45.5％，高于甲状腺腺瘤(22.4％)(P≤0.01)及癌旁甲状腺组织(17.5％)(P≤0.01)，而正常甲状腺组织染色阴性。见表1。 　　2.2 甲状腺癌中Bcl-2表达与甲状腺癌有关病理指标的关系，见表2。Bcl-2的表达程度与甲状腺癌组织学类型、淋巴结转移情况和临床病理分期有显著关系。在恶性度较高的未分化癌和滤泡状癌中，Bcl-2阳性率明显高于恶性度较低的乳头状癌；在有淋巴结转移病例或临床Ⅲ 、Ⅳ期病例，Bcl-2阳性率高于相应的无淋巴结转移和临床I、Ⅱ期病例，差异均有统计学意义(P0.01)。 　　3 讨论 　　细胞凋亡又称细胞程序化死亡，受基因调控，调控基因大体分为凋亡抑制基因和凋亡促进基因