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生物信息学 生物化学资料网 色谱扫盲班 第一课 色谱法是一种重要的分离分析方法，它是利用不同物质在两相中具有不同 的分配系数(或吸附系数、渗透性) ，当两相作相对运动时，这些物质在两相中进 行多次反复分配而实现分离。在色谱技术中，流动相为气体的叫气相色谱，流动 相为液体的叫液相色谱。固定相可以装在柱内，也可以做成薄层。前者叫柱色谱， 后者叫薄层色谱。根据色谱法原理制成的仪器叫色谱仪，目前，主要有气相色谱 仪和液相色谱仪。色谱法的创始人是俄国的植物学家茨维特。1905 年，他将从 植物色素提取的石油醚提取液倒人一根装有碳酸钙的玻璃管顶端，然后用石油醚 淋洗，结果使不同色素得到分离，在管内显示出不同的色带，色谱一词也由此得 名。这就是最初的色谱法。后来，用色谱法分析的物质已极少为有色物质，但色 谱一词仍沿用至今，在 50 年代，色谱法有了很大的发展。1952 年，詹姆斯和马 丁以气体作为流动相分析了脂肪酸同系物并提出了塔板理论。1956 年范第姆特 总结了前人的经验，提出了反映载气流速和柱效关系的范笨姆特方程，建立了初 步的色谱理论。同年，高莱(Golay)发明了毛细管拄，以后又相继发明了各种检 测器，使色谱技术更加完善。50 年代末期，出现了气相色谱和质谱联用的仪器， 克服了气相色谱不适于定性的缺点。则年代，由于检测技术的提高和高压泵的出 现，高效液相色谱迅远发展，使得色谱法的应用范围大大扩展。目前，由于高效 能的色谱往、高灵敏的检测器及微处理机的使用，使得色谱法已成为一种分析速 度快、灵敏度高、应用范围广的分析仪器。在这里主要介绍气相色谱分析法。同 时也适当介绍液相色谱法。气相色谱法的基本理论和定性定量方法也适用于液相 色谱法。其不同之处在液相色谱法中介绍。 第二课 气相色谱仪典型的气相色谱仪具有稳定流量的载气，将汽化的样品由汽化室带入 色谱柱，在色谱柱中不同组分得到分离，并先后从色谱柱中流出，经过检测器和 记录器，这些被分开的组分成为一个一个的色谱峰。色谱仪通常由下列五个部分 组成： 载气系统（包括气源和流量的调节与测量元件等）进样系统（包括进样 装置和汽化室两部分）分离系统（主要是色谱柱）检测、记录系统（包括检测器 和记录器）辅助系统（包括温控系统、数据处理系统等） 第三课 气相色谱仪－载气系统载气通常为氮、氢和氢气，由高压气瓶供给。由高压气瓶 出来的载气需经过装有活性炭或分子筛的净化器，以除去载气中的水、氧等有害 杂质。由于载气流速的变化会引起保留值和检测灵敏度的变化，因此，一般采用 稳压阀、稳流阀或自动流量控制装置，以确保流量恒定。载气气路有单柱单气路 和双柱双气路两种。前者比较简单，后者可以补偿因固定液流失、温度被动所造 成的影响，因而基线比较稳定。 第四课 气相色谱仪－进样系统进样系统包括进样装置和汽化室。气体样品可以用注射进 样，也可以用定量阀进样。液体样品用微量注射器进样。固体样品则要溶解后用 微量注射器进样。样品进入汽化室后在一瞬间就被汽化，然后随载气进入色谱柱。 根据分析样品的不同，汽化室温度可以在 50 一 400 ℃范围内任意设定。通常， 生物信息学 生物化学资料网 生物信息学 生物化学资料网 汽化室的温度要比使用的最高柱温高 10 一 50℃以保证样品全部汽化。进洋量和 进样速度会影响色谱柱效率。进样量过大造成色谱柱超负荷，进样速度慢会使色 谱峰加宽，影响分离效果。 第五课 气相色谱仪－分离系统色谱柱是色谱仪的分离系统。试样中各组分的分离在色谱 柱中进行，因此，色谱柱是色谱仪的核心部分。色谱往主要有两类：填充柱和毛 细管柱，现分别叙述如下:1．填充柱填充柱由柱管和固定相组成，柱管材料为不 锈钢或玻璃，内径为 2—4 毫米，长为 1—3 米。往内装有固定相，固定相又包括 固体固定相和液体固定相两种。2 ．毛细管往毛细管柱又叫空心柱，空心柱分涂 壁空心柱，多孔层空心柱和涂载体空心柱。涂壁空心柱是将固定液均匀地涂在内 径 0 ．1—0 ．5 毫米的毛钢管内壁而成。毛细管的材料可以是不锈钢、玻璃或石 英。这种色谱柱具有渗透性好、传质阻力小等特点，因此柱子可以做得很长(一 般几十米，最长可到三百米) 。和填充柱相比，其分离效率高，分析速度快,样品 用量小。其缺点是样品负荷量小，因此经常需要采用分流技术。柱的制备方法也 比较复杂；多孔层空心柱是在毛细管内壁适当沉积上一层多孔性物质，然后涂上 固定液。这种柱容量比较大，渗透性好，故有