4种渗透性抗冻剂对暗色唇鱼精子冷冻保存的影响.PDF

第３３卷第５期 水 生 态 学 杂志 Ｖｏｌ．３３，Ｎｏ．５ ２０１２年　９月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｙｄｒｏｅｃｏｌｏｇｙ 　Ｓｅｐ．　２０１２ ４种渗透性抗冻剂对暗色唇鱼精子冷冻保存的影响 １，２ １ １ １ １ 王晓爱 ，杨君兴 ，陈小勇 ，潘晓赋 ，李再云 （１．中国科学院昆明动物研究所 遗传资源与进化国家重点实验室，云南 昆明　６５０２２３； ２．中国科学院研究生院，北京　１０００４９） 摘要：４℃冷冻保存条件下，以冷冻精子活力、寿命和细胞膜完整率为指标，检测二甲亚砜（ＤＭＳＯ）、甘油（Ｇｌｙｃｅｒ ｏｌ）、乙二醇（ＥＧ）和甲醇（ＭｅＯＨ）４种渗透性抗冻剂对暗色唇鱼（Ｓｅｍｉｌａｂｅｏｏｂｓｃｕｒｕｓ）鲜精以及对精子冷冻保存效 果的影响。结果显示，４种渗透性抗冻剂对鲜精活力呈负作用，ＭｅＯＨ＜ＥＧ＜ＤＭＳＯ＜Ｇｌｙｃｅｒｏｌ；抗冻剂对鲜精寿命 呈负作用，ＭｅＯＨ＜ＥＧ＜ＤＭＳＯ和 Ｇｌｙｃｅｒｏｌ；抗冻剂对鲜精细胞膜完整率呈负作用，ＭｅＯＨ＜ＥＧ＜ＤＭＳＯ＜Ｇｌｙｃｅｒｏｌ。 在鲜精活力为（３６．１７±４．０６）％，寿命为（４７．５±３．１）ｓ，细胞膜完整率为（８６．２２±５．２９）％时，经过短期冷冻保 存，５％ ＭｅＯＨ和５％ ＥＧ解冻后暗色唇鱼精子活力最高，分别为（１８．３３±１．７０）％和（１７．８３±２．６７）％，与鲜精活 力差异显著（Ｐ＜０．０５）；５％ ＭｅＯＨ和５％ ＥＧ解冻后精子寿命最长，分别为（４４．３±３．６）ｓ和（４２．８±５．５）ｓ，５％ ＭｅＯＨ解冻后精子寿命与鲜精寿命差异不显著（Ｐ＞０．０５）；５％ ＭｅＯＨ解冻后精子细胞膜完整率最高，为（８５．６７ ±１．１１）％，与鲜精细胞膜完整率无显著差异（Ｐ＞０．０５）。研究表明，ＤＭＳＯ和Ｇｌｙｃｅｒｏｌ并不适合作为暗色唇鱼精 子冷冻的抗冻剂，ＭｅＯＨ和ＥＧ具有相似的保护作用，是暗色唇鱼精子冷冻保存潜在的渗透性抗冻剂。 关键词：渗透性抗冻剂；暗色唇鱼；精子冷冻 中图分类号：Ｑ９５２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１６７４－３０７５（２０１２）０５－００８８－０６ 　　自从 １９４９年首次用甘油作为抗冻剂冷冻成功 ，１９８２；Ｈｏｒｖａｔｈｅｔａｌ，２００８）。在鱼类遗传管理 ｅｔａｌ 保存精子以来（Ｐｏｌｇｅｅｔａｌ，１９４９），精子低温冷冻保 中，精子低温和超低温冷冻保存能有效地延长个体 存的研究取得了很大进展，并逐渐发展成为物种迁 的繁殖寿命，并在塘养种群的世代数最小化方面显 地保护和遗传种质资源保存的一个重要手段。抗冻 示出很广泛的应用潜力，但该技术仅在少数动物中 剂是影响精子冷冻保存的重要因素（陈松林，２００７； 使用（Ｆｒａｎｋｈａｍｅｔａｌ，２００２）。 王晓爱等， 暗色唇鱼（ＳｅｍｉｌａｂｅｏｏｂｓｃｕｒｕｓＬｉｎ）隶属于鲤科 ２０１２）。渗透性抗冻剂多是小分子物质， 渗透速度快，能轻易地渗透到细胞内使其脱水，在溶 （Ｃｙｐｒｉｎｉｄａｅ）、野鲮亚科（Ｌａｂｅｏｎｉｎａｅ）、唇鱼属（Ｓｅｍ 液中易结合水分子，发生水合作用，使溶液的黏性增 ｉｌａｂｅｏ）。随着鱼类资源的利用强度加大和捕捞技术 加，从而弱化了水的结晶过程，以此达到抗冻剂保护 的更新，鱼类生物多样性呈下降趋势，暗色唇鱼已成 的目的（Ｍｕｃｈｌｉｓｉｎ，２００５；陈松林，２００７）。二甲亚砜 为李仙江流域珍稀濒危物种（杨剑等，２０１０；杨永宏 （Ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅ，ＤＭＳＯ）、甘油（Ｇｌｙｃｅｒｏｌ）、乙二 等，２０１１）；１９８９年被列入云南省 ＩＩ级保护动物， 醇（Ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ，ＥＧ）和甲醇（ＭｅＯＨ）