重要致病性弧菌TaqMan实时PCR检测方法建立论文.pdf

山东大学硕士学位论文 9个浓度梯度的质粒为模板，每 (5)以1．0×108拷贝／pl一1．0X100拷贝／111 个浓度梯度做8个平行样，在伯乐公司的CFX96荧光定量PCR仪上进行扩增， 确定单重实时PCR反应体系的检测下限以及扩增效率。 系，并对双重实时PCR的检测下限进行评价。 对嗜水气单胞菌TaqMan实时PCR检测方法，检测下限的评价包括菌液的检 测下限和DNA的检测下限。将一系列稀释度的嗜水气单胞菌菌液人工污染健康 人的粪便，评价该检测方法从未经增菌处理的粪便中以及增菌3小时、8小时和 16小时的粪便中检测出嗜水气单胞菌的能力。 【结果】 建立了重要致病性弧菌的TaqMan实时PCR检测方法。具体结果为： membrane (1)霍乱弧菌外膜蛋白W基因(out proteinW，omp叻和拟态弧 mimicus 菌的溶血素基因(Vibrio 双重TaqMan实时PCR检测方法的待检基因。优化的反应体系中，霍乱弧菌引物