急性髓系白血病细胞单链DNA适体的体外筛选.PDFVIP

中南大学学报（医学版） 2012, 37(8) ; J Cent South Univ (Med Sci) 771 急性髓系白血病细胞单链 DNA 适体的体外筛选 朱平，王光平，张书芹，徐雅静，彭敏源，银辉，陈焱，谭三勤，陈方平 ( 中南大学湘雅医院血液科，长沙 410008) + - - [ 摘要 ] 目的：筛选识别急性髓系白血病 M2 型（acute myeloblastic leukemia M2 subtype，AML M2）CD33 /CD34 + - + - - 细胞的核酸适体 (aptamers)。方法：以 AML M2 型白血病 CD33 /CD34 细胞为靶细胞，正常人 CD33 /CD34 细胞为反 筛选细胞，采用细胞 - 指数富集配体系统进化 (cell-systematic evolution of ligands by exponential enrichment，C-SELEX) 技术，体外反复筛选单链 DNA（single strand deoxyribonucleic acid，ssDNA）文库的适体，经聚合酶链式反应 (polymerase chain reaction，PCR) 扩增产生次级文库。然后将最终轮次的次级 ssDNA 文库克隆、测序并分析各适体的一级和二级 结构。结果：琼脂糖凝胶电泳结果显示：每轮筛选出来的次级 ssDNA 文库 PCR 扩增产物均可见到清晰的 DNA 条带。 经过 13 轮的反复筛选，次级 ssDNA 文库与细胞结合的荧光强度从 2.14% 上升到 51.12%，至第 13 轮趋于稳定状态。 对 30 个克隆子序列测定结果显示：22 个适体一级结构分别含有 AAGTA，TATCT，AGATG 和 AAATT 4 个保守序列， 另 8 个适体无此保守序列。二级结构模拟结果显示：30 个适体含有 4 种不同的茎环、凸环模拟结构。结论：C-SELEX + - - /CD34 细胞适体有望用于白血 技术可用于急性髓系白血病原代细胞适体的筛选，筛选到的 AML M2 型白血病 CD33 病的诊断与治疗。 [ 关键词 ] 细胞 - 指数富集配体系统进化；急性髓系白血病，M2 型；适体 DOI:10.3969/j.issn.1672-7347.2012.08.003 In vitro selection of single strand deoxyribonucleic acid aptamers binding to cells from patients with acute