组织培养实验.doc

《植物组织培养实验指导》 《植物组织培养实验指导》的相关说明 一、本指导用于《植物组织培养概论》课程的实验教学。 二、各专业班级根据实际情况做相应调整，调整情况详见各专业班级的授课计划。其中15个课时的内容调整如下： 实验一、二、五 3学时 实验六 3学时 实验七 3学时 实验九、实验十二 3学时 实验十三 3学时 实验一　　实验室基本设备及其用途的识别 目的 认识植物组织培养实验室的基本结构，必须的基本设备及其用途与作用方法。 实验室的基本结构 化学实验室（工作室）培养基药品称量、配制、分装、灭菌；材料预处理；培养材料的观察分析；制蒸馏水。 设备、药柜、工作台、蒸馏水器、天平、冰箱，手提高压消毒锅、显微镜、解剖镜、各种玻璃仪器、金属仪器等。 安装水、电、排气等装置。 接种室 ①无菌操作室 ②接种箱 ③超净工作台 培养室 洗涤、消毒室；卧式高压消毒锅。 温室（培养大棚）。 实验二　　常用仪器、必要器皿、几种主要设备的使用方法、 常用几种药剂的配制 目的 认识植物组织培养必需的仪器、器皿，几种主要设备的使用方法、常用几种药剂的配制。 常用仪器 蒸馏水器（学习操作） 手提式高压消毒锅、卧式高压消毒锅（学习使用、操作） 天平 ⑴　药物天平（工业天平）、粗天平、（精密度1/10） ⑵　扭力天平（精密度1/100） ⑶　分析天平（精密度1/10000） 超净工作台（学习、使用、操作） 电热干燥箱（烘箱） 恒温光照培养箱（学习、操作） 电冰箱 显微镜和解剖镜 手提式解剖镜（学习、使用、操作） 立体解剖镜 普通显微镜 旋转培养机 离心机（学习、使用、操作） 酸度测定仪：⑴ 精密PH4－7试纸；⑵ 笔型　袖珍酸度计。 必要的器皿 （一）玻璃器皿 1.　培养器皿 试管 三角烧瓶（锥形瓶） 圆形高形培养瓶（罐头瓶） 培养皿 扁身培养瓶 L型和T型管 凹面载玻片 2.　盛装器皿 试剂瓶 烧杯 3.　计量器皿 量筒 容量瓶 吸管 4.　其它器皿 　滴瓶、称量瓶、漏斗、玻璃管、注射器等实验室常用器皿。 （二）金属器械 1.　镊子类 20－25cm长型镊子（接种或转移愈伤组织） 尖端弯曲“枪型”镊子（镊取较小的植物组织） 尖头钟表镊子和鸭嘴镊子（剥离表皮用） 尖端为小铲状镊子（挖取带琼脂培养基的培养物） 2.　解剖刀和刀类 眼科用刀种牛痘疫苗的菱形刀（切割柔软组织中小细胞团） 解剖刀（手术刀） 双面刀片焊接在玻棒上（切取茎尖用） 锋利小刀、大刀和小铁锹 3.　剪刀类 ①　解剖剪　　②　眉剪　　③　眼科剪　　④ 18－25cm弯头剪　 　⑤　俢枝剪　 4.接种针 四、几种常用药剂的配制 用95%尝试酒精配比不同浓度的酒精的配制。 学习配制70%和75%酒精。 消毒剂 1.　20%次氯酸钠溶液　　称取20g次氯酸钠用少许水溶解，100ml水定容。 2.　0.1%升汞（HgCl2）溶液　　称取0.1g HgCl2少许水溶解，100ml水定容。 洗涤剂 1.　2HCl酒精　　95%酒精100ml加入2mlHCl 2.　硫酸－重铬酸钾洗液 　称取10g重铬酸钾加入蒸馏水90ml，加热溶解冷却后，逐渐加入浓硫酸175ml，放入棕色玻璃瓶备用，（注意：切记不可将盛过洒精，甲醛等原剂的药品玻璃器皿直接泡入洗液在，因为重铬酸钾是一种强的氧化剂，一旦被还原氧化，洗液变绿，失去洗涤作用）。这些器皿必须用自来水冲洗干净并晾干再浸入洗液。 1摩尔浓度(mg/L )NaOH 和1摩尔浓度（mg/L）HCl配制。 摩尔浓度是指用1升（1000ml）溶液中所含溶质的分子量数来表示的溶液的浓度。用M表示。 1.　 NaOH摩尔浓度（M） NaOH摩尔质量=分子克数=40g 1M NaOH是指1000ml溶液中含有40克摩尔质量的NaOH，现要配制100ml 40×0.1＝4g 称取NaOH4g，用少量溶解，定容100ml. 2. 　HCl的摩尔浓度 具体配制酸的mol浓度时，应考虑原浓酸的比重mol浓度。 　　要求配制的mol浓度×需配制的体积×原酸分子量 V＝——————————————————————— 　　原酸的百分浓度×原酸的比重×1000 配制1.0M　HCl　100ml，量取38%，比重为1.19的HCl8.06ml加蒸馏水，定容至100ml。 实验三　　洗涤――灭菌 植物组织培养能否成功重要的一环是在无菌条件下进行操作与培养，导致污染的来源主要有：⑴　器皿和用具；⑵　培养基；⑶　培养材料；⑷　工作人员本身；⑸　操作时的空气。防止污染的有效方法是将所有与培养有关的器皿，用具、培养基、接种室、培养室等进行灭菌和