CQ11逆转多药耐药人胃癌细胞株对多柔比星的耐药.docVIP

CQ11逆转多药耐药人胃癌细胞株对多柔比星的耐药 论文联盟www.LWLM.com编辑。 作者：吴达龙 睢凤英 张成文 吕焕章 【摘要】 目的: 探讨氯喹衍生物CQ11对耐长春新碱(vincristine, VCR)人胃癌多药耐药(multidrug resistance, MDR) 细胞株SGC7901/VCR的耐药逆转作用。 方法：将SGC7901和SGC7901/VCR细胞分别与各种浓度的多柔比星(doxorubicin, DOX)和/或CQ11在体外共同培养，采用MTT法检测其细胞毒作用；采用荧光分光光度计测定细胞内DOX蓄积量。结果：SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药程度是SGC7901细胞的37.5倍。1.0、2.5 和 5.0 mol/L的CQ11分别使DOX对SGC7901/VCR细胞的敏感性分别增加到2.2倍(P0.01)、5.5倍(P0.01) 和14倍(P 0.01)。DOX蓄积实验表明，CQ11能显著增加SGC7901/VCR细胞内DOX蓄积，而对SGC7901细胞内DOX蓄积无明显影响。结论：通过增加细胞内DOX蓄积量，CQ11在体外能有效逆转SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药性 【关键词】 多药耐药; 氯喹; 胃癌; 逆转剂 肿瘤多药耐药(multidrug resistance, MDR)指肿瘤细胞一旦对某种化疗药物产生耐药性，同时对其它结构上无关、作用机理各异的抗肿瘤药物也产生交叉耐药性［1］。MDR是一种独特的广谱耐药现象，是导致化疗失败的重要原因，许多天然来源的抗肿瘤药物如长春新碱(vincristine, VCR)、紫杉醇等及蒽环类抗癌抗生素如多柔比星(doxorubicin, DOX)、柔红霉素都极易发生MDR［1~3］。MDR主要的耐药机理为多药耐药基因mdr1扩增及其蛋白产物P-糖蛋白(permeability glycoprotEin, Pgp)过表达。作为一个ATP依赖性的药物转运泵，Pgp能主动将疏水性抗肿瘤药物泵出胞外, 从而减少细胞内药物蓄积, 增加药物外排［3］。MDR逆转剂，如维拉帕米和环孢菌素A，能与Pgp结合，抑制Pgp的药物外排功能，增加耐药细胞内抗肿瘤药蓄积，从而恢复细胞对抗肿瘤药的敏感性。然而，大量的临床研究结果表明，上述肿瘤MDR逆转剂由于体内毒性大，体内难以达到有效逆转浓度［3］。 因此积极寻找高效低毒的新型MDR逆转剂，已成为肿瘤MDR研究的热点。 氯喹 CQ11 图1 氯喹和氯喹衍生物CQ11的化学结构 CQ11是以抗疟药氯喹的结构母核为基础, 经侧链改造而获得的新化合物(化学结构见图1)， 由本课题组合成。本研究以耐VCR人胃癌MDR细胞株SGC7901/VCR为体外模型， 研究CQ11对SGC7901/VCR细胞的体外MDR逆转效应。 1 材料与方法 1.1 药物和试剂 CQ11由本课题组自行合成, 以二甲亚砜(dimethylsulfoxide , DMSO) 溶解。MTT和DOX购自Sigma公司。 1.2 细胞培养 SGC7901细胞和SGC7901/VCR细胞（将SGC7901细胞在含浓度不断递增的VCR的培养基中连续培养所获得的耐药细胞株）均由本室保存［4］，细胞均用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基，在37、5% CO2孵箱中培养。 SGC7901/VCR在含0.80 mol/L VCR培养液中稳定生长, 在正式实验前2周撤去VCR。 1.3 细胞存活率测定 采用MTT法测定细胞毒作用［4］。取生长旺盛SGC7901和SGC7901/VCR细胞，稀释后接种于96孔平底培养板中（每孔含4.0×103 细胞），置CO2培养箱中培养。 接种24 h 后分别加入不同浓度的DOX 和/或 CQ11，使液体总量达到每孔200μL; 继续培养72 h，弃去培养液，每孔加MTT10μL (5.0 g/L in PBS), 培养4 h, 弃去MTT，每孔加DMSO 150μL, 在微孔板震荡器上振荡10 min, 成色产物溶解后用酶标仪测570 nm处吸光度值。以不加药的瘤细胞组为对照，求给药组IC50，并 计算 耐药逆转倍数(reversal fold, RF)。 1.4 细胞内DOX蓄积实验 DOX蓄积实验参照我们以往的报道进行［2］。简述如下：取生长旺盛的SGC7901 或SGC7901/VCR细胞, 调节其浓度至1.0×106/mL, 加入DOX 4.0 μmol/L和不同浓度的CQ11 (分别为 0.00, 0.25, 0.50, 1.0, 2.5, 5.0 和 10 μmol/L) , 在37、5% CO2 孵箱中培养60 min, 取上述溶液1.0 mL, 100×g 离心5 m