细胞的破碎与分包涵体.pptVIP

细胞的破碎与分离 概述 概述 细菌细胞壁结构 酵母细胞壁结构 一、细胞壁的组成和结构 细胞破碎机理图 细胞破碎 细菌破碎的主要阻力来自于肽聚糖的网状结构，网状结构越致密，破碎的难度越大，革兰氏阴性细菌网状结构不及革兰氏阳性细菌的坚固； 酵母细胞壁破碎的阻力也主要决定于壁结构交联的紧密程度和它的厚度； 由于霉菌细胞壁中含有几丁质或纤维素的纤维状结构，其强度比细菌和酵母菌的细胞壁有所提高。 细胞破碎 细胞破碎 1.珠磨法（Bead mill） 细胞破碎 高压匀浆器 细胞破碎 细胞破碎 超声破碎法（Ultrasonication 细胞破碎 撞击破碎 化学破碎方法 化学破碎方法 物理破碎方法 破碎率的测定 破碎率的测定 包涵体的分离和蛋白质复性 包涵体： 指细菌表达的蛋白在细胞内凝集，形成无活性的固体颗粒 。 形成原因： 外源蛋白在大肠杆菌中的积累 包涵体表达形式的优点 在一定程度上保持表达产物的结构稳定; 能避免细胞内蛋白水解酶的作用，有利于目标蛋白的富集; 简化外源基因表达产物的分离操作; 能够表达对大肠杆菌宿主有毒或有致死效应的目标蛋白 包涵体表达形式的缺点 包涵体获得几种常见的工艺路线(一) 包涵体获得几种常见的工艺路线（二） 包涵体的分离和蛋白质复性 包涵体的溶解 包涵体的分离和蛋白质复性 包涵体的复性 复性注意事项 最适p