河南科技学院常景玲第六章8.ppt

正相萃取：酸化pH1.8-2.0，滤液：醋酸丁酯＝1：0.3，碟片式离心机分离（浓缩1.5-2.1） 反相萃取：pH6.8-7.4（磷酸盐、碳酸盐缓冲液）。把青霉素从丁酯中提取到缓冲液中。 反复萃取2－3次，达到结晶要求。 萃取条件：10℃下。萃取罐冷冻盐水冷却。 逆流萃取过程 萃取液中添加活性炭，除去色素 过滤，除去活性炭。 4、脱色 * 6.1 微生物发酵与制药 6.2 微生物生长与生产的关系 6.3 制药微生物生产菌种建立 6.4 培养基制备 6.5 灭菌工艺 6.6 发酵培养技术 6.7 发酵工艺过程的控制 6.8 青霉素的生产工艺 第六章微生物发酵制药工艺 青霉素的概述 生产菌的生物学特性 发酵工艺过程 提炼工艺过程 6.8 青霉素的生产工艺 1929: Fleming在葡萄球菌培养皿中，污染的霉菌周围出现透明的抑菌圈。 杀菌物质，断言太不稳定，无法分离并用作药物。 1939：牛津病理家Howard Florey化学家Ernst Chain,Norman Heatley。发酵瓶培养霉菌，培养里提取，测活性，青霉素结晶。 6.8.1 概述－发现（1） 1940:8只鼠注射链球菌，提取物对4只治疗。未经治疗鼠在24小时内死亡，治疗鼠存活数天至数周。 1941年2月开始治疗第一批人类病人。 1943：威斯康辛大学小组，取得突破 生产菌表面培养：几十个单位。 深层培养产黄青霉：100U/ml。 X、UV诱变育种：1000－1500U/ml。 不产色素变种：66000－70000U/ml 目前：85000U/ml。 细胞壁合成中的肽多糖合成的第三阶段 肽多糖的D-丙氨酰-D-丙氨酸二肽类似物 竞争性与转肽酶结合，使转肽酶不能催化多肽链之间的交联。 生长中的细胞有效，静止细胞无效 高效、安全的抗细菌感染药物 6.8.1 概述－作用机理（2） （1）临床抗感染治疗：大多数革兰氏阳性菌和某些革兰氏阴性细菌及螺旋体等。 毒性小，但需要皮试。 （2）各种半合成抗生素的原料： 氨苄青霉素，磺苄青霉素，乙氧萘青霉素 头孢菌素母核。 6.8.1 概述－应用（3） 6-氨基青霉烷酸（6-aminopenicillanic 6APA）苯乙酰衍生物。 侧链基团不同，形成不同的青霉素 G：苄基青霉素，C6H5CH2-CO-，为主 双氢霉素F：戊青霉素 X：对羟苄基青霉素 F：2-戊烯基青霉素 K：庚青霉素 V：苯氧甲基青霉素 产品：钠、钾、普鲁卡因、二苄基乙二胺 6.8.1概述－分子结构及衍生物（4） 产黄青霉：Penicilliumchrosogenum孢子:绿色和黄色 菌落：平坦或皱褶，圆形。 青霉穗:分生孢子链状??深层培养菌丝：球状和丝状两种。 6.8.2 青霉素生产菌的生物学特性 第1期：分生孢子萌发，具有小泡。 第2期：菌丝繁殖，嗜碱性，类脂肪小颗粒。 第3期：脂肪包涵体，贮藏物，嗜碱性很强。 第4期：空泡，嗜碱性减弱，开始产生抗生素。 第5期：大空泡，中性染色大颗粒，脂肪包涵体消失，青霉素产量最高。 第6期：个别细胞自溶，胞内无颗粒，释放氨，pH上升。 第7期：菌丝完全自溶，仅有空细胞壁。 发酵培养下的生长过程及细胞学变化 规定时间取样，显微镜观察7个时期的态变化，控制发酵。 1－4期为菌丝生长期，3期的菌体适宜种子。 4－5期为生产期，生产能力最强，通过工程措施，延长此期，获得高产。 第6期到来之前结束发酵。 镜检控制 青霉素生产流程框图 斜面种子：砂土孢子用甘油、葡萄糖、蛋白胨组成的固体培养基进行培养 米孢子：移植到小米或大米固体培养基上，生长7天，25℃ 注意：每批孢子必需进行严格摇瓶试验，测定效价及杂菌情况。 6.8.3 发酵工艺过程 一级种子发酵：发芽罐，孢子萌发，形成菌丝。 培养基：葡萄糖，玉米浆，碳酸钙，玉米油，消沫剂等。 空气流量1：3（体积比）；300-350rpm； pH自然，温度27±1℃, 40h 二级种子罐：繁殖罐，大量繁殖。接种量10％ 培养基：葡萄糖、玉米浆，玉米油，消沫剂等。 1:1-1.5；250-280rpm；pH自然，25±1℃。10-14h 质量：菌丝致密，菌丝粗壮，III期，倍增期6-8h 2、种子罐培养工艺 三级罐：生产罐；接种量20％ 培养基：花生饼粉，葡萄糖，尿素，硝酸铵，硫代硫酸钠，苯乙酰胺，CaCO3, 玉米油, 硅油. 参数条件： 通气量1：0.8-1.2；150-200r/min； 前60小时:pH6.4-6.6，26℃； 60小时后: pH6.7, 24℃。 3、生产罐培养工艺 操作方式：反复分批式发酵 发酵罐：100M3，装料80M3. 带放: 6-10次，带放量10％，间隔24h。 发酵周期：180-220h 4、发酵培养与过程控制 青霉素的生产周期 发酵动力学 前40小时：