酿酒酵母乙醇脱氢酶Ⅱ基因反义干扰及对乙醇发酵的影响.pdf

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2015, Vol.31, No.11 酿酒酵母乙醇脱氢酶Ⅱ基因反义干扰及对 乙醇发酵的影响 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 薛婷 ，陈栋才 ，柳燕 ，苏小玫 ，林荣华 ，陈由强 （1.福建师范大学生命科学学院，福建福州 350117）（2.福建省发育与神经生物学重点实验室，福建福州 350117） 摘要：通过构建酿酒酵母沉默表达载体PURH-ADH2 ，使ADH2 基因在PGK 强启动子、CYC1 终止子在特定区域内进行干扰和 表达。采用BamHI 和XmalI 限制性内切酶对SADH2 基因和PURH 质粒进行双酶切，构建反义重组表达质粒PURH-SADH2，通过高 效酵母转化法和电转法将重组质粒组件转化至酿酒酵母SY01 细胞中，获得阳性克隆菌株JY01。酿酒酵母JY01 突变菌株与出发菌株 SY01 和Y01 发酵试验结果相比，JY01 甘油脱氢酶酶活比出发菌株Y01 与SY01 分别下降了16.31%和13.5%；当酿酒酵母Y01、SY01 和JY01 菌株发酵36~60 h 时，JY01 菌株甘油含量相比Y01 分别下降了16.34%、14.25%、14.89%；当酿酒酵母突变菌株发酵48 h 时， Y01 、SY01 和JY01 的乙醇浓度分别为6.243 g/100 mL、7.145 g/100 mL 和7.288 g/100 mL ，酿酒酵母JY01 发酵液乙醇量比比原始菌 株Y01 乙醇含量提高了14.33%。结果表明通过反义干扰ADH2 基因5’UTR 序列，能有效干扰酵母工程菌株ADH2 转录与表达，削 弱甘油积累途径，促进乙醇代谢途径。 关键词：酿酒酵母；乙醇脱氢酶；甘油脱氢酶；PURH-ADH2；PCR 文章篇号：1673-9078(2015)11-135-141 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2015.11.022 Anthocyanin Antisense Interference of Ethanol Dehydrogenase II in Saccharomyces cerevisiae and Its Influence on Ethanol Fermentation XUE Ting1,2, CHEN Dong-cai1,2, LIU Yan1,2, SU Xiao-mei1,2, LIN Rong-hua1,2, CHEN You-qiang1,2 (1.College of Life Sciences, Fujian Normal University, Fuzhou 350117, China) (2.Key Laboratory of Developmental and Neural Biology, Fuzhou 350117, China) Abstract: The aim was to interfere with and repress the expression of the alcohol dehydrogenase II (ADH2) gene in a specific region by constructing a silencing expression vector PURH-ADH2 . The silencing expression vector contained the ADH2 gene, a PGK strong promoter, and a CYC1 terminator. Using BamHI and XmaI restriction enzymes for the double digestion of the SADH2 and PURH plasmid, the a