实验2分离以尿素为氮源的微生物.pptVIP

分离纯化 原理：设计特殊的分离培养基，即人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。常用选择培养基筛选。 通过观察微生物在选择培养基上生长状况或生化反应如透明圈、变色圈等进行分离。 本课题的培养基以尿素为唯一氮源。 变色圈法：在平板中加入指示剂或显色剂，使所需微生物能被快速鉴别出来。产生有机酸或胺等碱性物质的微生物，通常采用pH值指示剂可检测出来。 在本课题提供的选择培养基的配方中，尿素是培养基中的惟一氮源，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。 实际上，微生物的培养是一个非常复杂的问题，比如有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能够在选择培养基上生长的微生物不一定都是所需要的微生物，还需要进一步的验证。 能够在选择培养基上生长的微生物是否都是所需要的微生物？ * 接种，取0.1毫升菌悬液 分离以尿素为氮源的微生物 实验2 实验目的： 1．使用专一的培养基（含有尿素）分离专一的细菌（有脲酶的细菌） 2．利用指示剂颜色的变化检知酶（脲酶）所催化的反应 实验原理： 脲(NH2)2C=O即尿素，是蛋白质降解的产物。 土壤中有一些细菌含有脲酶可以分解尿素， 利用尿素作为其生长所需的氮源(反应式) 2NH3 红色 尿素 中性 碱性 与酚红颜色反应： 黄色 如何从土壤众多的 微生物中分离出它们呢 利用以尿素为唯一氮源的培养基进行筛选 细菌产生的脲酶向周围扩散，将培养基中的尿素分解，产生的氨使培养基变碱，于是酚红由黄变红。随着培养时间的延长，红色区域的面积越来越大。 利用以尿素为唯一氮源的培养基进行筛选 变色范围 ph 6.4-8.2 如果要验证以尿素维唯一氮源的培养基对土壤中的细菌确实有选择作用，你该如何设计实验？ ★ 举一反三 用不含氮源的培养基进行筛选 用不含碳源的培养基进行筛选 用添加了青霉素的培养基进行筛选 用含高浓度NaCl的培养基进行筛选 实验原理： 脲(NH2)2C=O即尿素，是蛋白质降解的产物。 土壤中有一些细菌含有脲酶可以分解尿素， 利用尿素作为其生长所需的氮源(反应式) 2NH3 红色 中性 碱性 酚红反应： 黄色 如何从土壤众多的微生物中分离出它们呢 利用以尿素为唯一氮源的培养基进行筛选 动脑筋： 请你说出培养基的类型和组成吗 你能提供一种方法，判断分解尿素的细菌确实能将尿素分解成氨吗？ 配制培养基 ★ 尿素培养基 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g 酚红 0.25g 尿素 10ml ★ LB培养基 蛋白胨 0.25g 酵母粉 0.12g NaCl 0.25g 琼脂 0.5g 水 25ml 水 15ml 琼脂糖 琼脂是混合物，含少量含氮化合物，能被以尿素为氮源的细菌利用，不利于对这类细菌的筛选。 实验组 对照组 含C,N，无机盐等 （一）制备培养基： （二）制备细菌悬液 实验组 对照组 全营养LB固体培养基 尿素固体培养基 灭菌待用 灭菌待用 尿素高温下会分解，怎么办？ 灭菌后冷却至60℃， 加入用G6玻璃漏斗过滤(使之无菌)的10mL尿素溶液，待用 1g土壤 10-3溶液 取0.5ml 加到4.5ml的无菌水中 （一）制备培养基： （二）制备细菌悬液 实验组 对照组 全营养LB固体培养基 尿素固体培养基 灭菌待用 灭菌待用 尿素高温下会分解，怎么办？ 灭菌后冷却至60℃， 加入用G6玻璃漏斗过滤(使之无菌)的10mL尿素溶液，待用 （一）制备培养基： （二）制备细菌悬液 制备成10-4、10-5土壤稀释液 实验组 对照组 全营养LB固体培养基 尿素固体培养基 （三）涂布分离细菌 取10-4和10-5的土壤溶液各0.1ml,分别加到LB培养基和尿素培养基的培养皿里 倒平板 对照平板 3个尿素平板(平行重复组) LB 培养基 尿素培养基 1 2 3 平均 10-4 10-5 ◆ 2个LB平板，6个尿素平板 （三）涂布分离细菌 取10-4和10-5的土壤溶液各0.1ml,分别加到LB培养基和尿素培养基的培养皿里 移液器 （三）涂布分离细菌 取10-4和10-5的土壤溶液各0.1ml,分别加到LB培养基和尿素培养基的培养皿里， 移液器 用保存在70%酒精中的玻璃刮刀将菌液涂布到整个平面上。 涂布前后玻璃刮刀需要灼烧吗？ 制备培养基，灭菌 → 倒平板 →培养→观察 实验步骤： 称土样→