水产品兽药残留检测技术.ppt

旋转蒸发：溶剂可回收 气流吹蒸：少量溶剂 K-D浓缩器：浓缩，回流，洗涤，定容 真空离心：热敏性组分，粘稠液体 再溶解使用流动相的初始比例作溶剂 4、浓缩富集及再溶解 水产品兽药残留检测样品前处理技术 步骤 1.确立质谱条件 2.建立LC方法 3.内标选择 4.前处理方法选择 建立液相色谱串联质谱定量分析方法 文献检索：了解化合物的性质包括化合物的结构、化合物的极性及化合物的pKa值。首先了解化合物的结构，可大概的推断其碎片离子的断裂方式，选择较为稳定的碎片离子作为定量的子离子，也可以根据经验判断选用哪种离子源更为合适；根据化合物的极性大小，可以选择一种或几种恰当的溶剂作为溶媒，既能保证完全将样品溶解，又能提高化合物的质谱响应；化合物的pKa值，有助于选择流动相的添加剂及其pH值，从而提高质谱响应。 建立液质定量分析方法 建立液质定量分析方法 1.连接管路 2. 选择Q1MS扫描模式和Full Scan扫描类型 3. 设置离子源参数 4.将流动相导入质谱仪，观察到待测化合物的准分子离子峰峰强度在10的6次方左右 。 1、确立质谱条件（化合物优化） 建立液质定量分析方法 5. 选择MS Only优化模式和Syringe Pump Infusion入口类型选项 6.优化Tube Lens Offset、Spray Voltage、Sheath Gas Pressure、Aux Gas Pressure获得待测化合物稳定的准分子离子峰。 7.选择MS+MS/MS优化模式设置Parent Mass、Charge State和Num Product对子离子进行优化。 8. MRM优化模式优化Tube Lens Offset和Collision Pressure 9.记录并保存子离子全扫描质谱图。保存Tune Method文件。 1、确立质谱条件（化合物优化） 建立液质定量分析方法 1、确立质谱条件（化合物优化） 建立液质定量分析方法 1、确立质谱条件（化合物优化） 建立液质定量分析方法 2、确立LC条件 在液相-紫外检测中，使用的添加剂的种类繁多，可以是挥发性的酸或者碱（如甲酸、乙酸和氨水等），也可以是不易挥发的缓冲盐（如磷酸二氢钠-磷酸缓冲液、磷酸二氢钾-磷酸缓冲盐）。但是在液质分析中，基于质谱检测的原理，我们只能使用可挥发的酸碱或缓冲盐，那么种类就会受到极大的限制。在日常分析中使用到的添加剂主要有甲酸、乙酸、三氟乙酸、氨水和甲酸铵、乙酸铵等缓冲盐。三乙胺在紫外检测中，常作为扫尾剂，但是在液质检测中是绝对禁止的。因为三乙胺进入质谱后不易清除，残留及其严重，能够抑制离子的响应。 在液相色谱紫外检测中，要求化合物之间R≥1.5，进行定量，那R最好≥2.0，要求准确的配制流动相，精确的调好流动相的pH及添加剂的浓度。但在液质分析中，我们经常使用多反应监测（MRM/SRM）对化合物进行定量，由于MRM要求选择两次离子，因此它具有很高的专属性，基于这点我们对多个化合物同时进行检测时，不需要彼此间达到完全分离就可以对他们进行定量分析。 建立液质定量分析方法 2、确立LC条件 由于生物样品中含有大量的基质，这些基质的存在会严重的干扰和影响化合物的测定，因而我们需要利用色谱将化合物与基质分开，从而降低基质效应的影响，即降低离子抑制。 待测化合物要在色谱柱上有保留，并且适当延长保留时间。三聚氰胺最好用离子柱。 建立液质定量分析方法 3、内标选择 内标工作方式： 在每个样品、标准和空白中加入 测定到每个样品中内标的响应 根据实际测定内标响应值与预期内标响应值的比值来校正其他化合物的信号 用分析信号和内标的比作标准曲线或乘校正因子或除内标回收率 计算未知样品的分析信号和内标的比值并从标准曲线中读出信号 建立液质定量分析方法 3、内标选择 1.样品中不存在或者可以忽略 2.没有受到质谱干扰 3.没有对分析对象产生质谱干扰 4.不容易受到环境污染 5.和分析对象质量数接近（氘代物） 6.离解方式和分析对象接近 建立液质定量分析方法 能力验证经验及基质效应 为什么要采用LC-MS 考核化合物的含量越来越低 基体越来越复杂 药残的能力验证建议的第一方法 例如： 干鱼粉中的恩诺沙星和环丙沙星 鱼肉中的氟苯尼考 能力验证经验及基质效应 考核中的质量控制方法 控制样品空白 平行双样测定或三样 加标回收 标准参考物质的同步分析 重复测定和仪器比对 能力验证经验及基质效应 加标回收：可分为前处理加标回收和上机加 标（单点标准加入） 水产品兽药残留检测技术 主要内容 兽药残留概述 前处理技术