选修三 动物细胞工程.ppt

2.2动物细胞工程 动物细胞的培养过程 思考讨论：在动物细胞培养过程中，为什么要用胰蛋白酶对取出的动物组织进行处理？ 有关概念: 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。初次培养叫原代培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 植物组织培养和动物细胞培养的比较 需要解决下列问题： 1、什么叫动物细胞融合？植物体杂交技术与动物细胞融合有什么不同呢？ 2、动、植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？ 3、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？两者的融合过程是否也一样？ 动物细胞融合 二、单克隆抗体 B淋巴细胞与抗体的关系： 单克隆抗体 如何大量生产单克隆抗体？ 利用B淋巴细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用动物细胞融合技术将两种细胞融合，获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程 细胞核 病毒颗粒 细胞核 单核 思考讨论： 1.为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？ 因为灭活的病毒丧失感染性，保留融合活性。 2.细胞融合技术应用于哪些方面？ 细胞学、遗传学、免疫学及 利用杂交瘤技术制备单克隆抗体。 什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激 后产生的、并能与该抗原发 生特异性结合的具有免疫功 能的球蛋白。 浆细胞产生抗体。 １．B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。 ２．动物体内的B淋巴细胞（浆细胞）可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。 ３．每一个B淋巴细胞（浆细胞）只能产生一种抗体。 传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？怎样解决这个问题？ 传统抗体生产： 反复注射抗原，分离抗体。 缺点： 产量低，纯度低，抗体特异性差。 解决办法：克隆单一的B淋巴细胞。 　　由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 特点： 特异性强、灵敏度高、产量高。 一个B淋巴细胞在体外可能无限增殖吗？ 不可能！ 如何筛选？ 融合方式？ 单克隆抗体制备过程 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选，继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 体外培养 注射到小鼠腹腔 单克隆抗体 思考：细胞融合后培养液中有几种细胞？ B，B-B ，B-瘤 ，瘤-瘤 ，瘤 筛选杂种细胞 （ B-瘤） 选择培养基 （未融合的或融合的具有同种核的细胞死亡） 杂交瘤细胞（ B-瘤） 筛选杂交瘤细胞原理： 已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被培养基中加氨基喋呤阻断。 3.杂交瘤细胞有D、S途径，培养基中加氨基喋呤阻断D途径， 还有S途径，可进行DNA复制，并无限增殖。 1.人淋巴细胞（B、B-B）：D、S途径，一般不分裂； 2.鼠骨髓瘤细胞（瘤、瘤-瘤）：只有D途径，没有S途径， 但能不断分裂增殖，培养基中加氨基喋呤阻断D途径， 也不增殖。 两次筛选原理不同： 第一次筛选：杂交瘤细胞选择性培养基HTA——筛选出杂交瘤细胞； 第二次筛选：有限稀释克隆细胞，单独培养，筛选出产生专一性抗体的杂交瘤细胞。 第一次筛选：杂交瘤细胞选择性培养基HTA——筛选出杂交瘤细胞 第二次筛选：有限稀释克隆细胞，单独培养，筛选出产生专一性抗体的杂交瘤细胞 单克隆抗体 思考： 1、单克隆抗体制备过程利用了哪些生物学原理或技术？ 免疫原理，细胞增殖原理，动物细胞融合技术和动物细胞培养技术。 2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，即既能无限增殖，又能产生专一的抗体。因而可以获得大量单克隆抗体 单克隆抗体的应用： 与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高，优越性十分明显。 主要应用： 1、临床诊断：作为诊断试剂——找抗原。 2、作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤 　　资料：目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定位体内“病灶”也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。 * * 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体技术 核移植 动物细胞工程常用技术 一、动物细胞培养 1.发展历史: 20世纪初，人们不