川芎嗪对糖尿病肾病大鼠肾小管间质病变及转化生长因子-β1的影响.docVIP

川芎嗪对糖尿病肾病大鼠肾小管间质病变及转化生长因子-β1的影响 【摘要】 　　目的观察川芎嗪（TMP）对糖尿病肾病（DN）大鼠肾小管间质病变及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达水平的影响。方法SD大鼠单侧肾切除链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病肾病动物模型。大鼠随机分为5 组，每组12只，分别为模型组,正常手术组，贝那普利（Lotensin）组，川芎嗪高、低剂量组。除空白组和模型组外，其余各组按组别分别予贝那普利1.7 mg/（kg·d）、川芎嗪150，50 mg/（kg·d）灌胃，共12周。实验第4周、第8周和第12周，测定尿微量蛋白排泄（UAER）； 治疗 12周，测定各组大鼠血清FPG，BUN，Scr，免疫组化检测肾小管间质TGF-β1表达。结果模型组大鼠UAER 进行性升高，FPG，BUN，Scr明显升高 (P＜0.01；P＜0.05)，肾小管间质TGF-β1表达明显增加（P＜0.01）。川芎嗪高剂量组大鼠UAER明显降低，FPG，BUN，Scr下降，肾小管间质TGF-β1表达明显减少，与模型组比较均有显著性差异（P＜0.05)。结论川芎嗪能下调DN大鼠肾小管间质TGF-β1表达，缓解肾小管间质损害，从而达到对DN肾功能的保护作用。 【关键词】 川芎嗪 糖尿病肾病 转化生长因子-β1 病理 　　糖尿病肾病（DN）是终末期肾衰竭的主要原因之一。DN发生的机制目前仍不十分清楚,涉及到一系列分子事件和组织学改变,特别是多种细胞因子通过不同途径、不同机制发挥重要作用。这些细胞因子通过旁分泌和自分泌方式发挥其病理生理作用，导致系膜细胞生长增殖，细胞外基质增加、增厚和系膜区扩张，促进DN的发生。DN时TGF-b1mRNA及其蛋白水平的升高与肾功能不全、系膜细胞增生和间质纤维化密切相关，参与了DN发生 发展 的多个环节［1，2］。川芎嗪是从中药川芎根茎中提取分离的生物碱单体，临床研究证实川芎嗪对ＤＮ具有显著的治疗作用［3］，但是否为通过干预DN肾小管间质损害，减少TGF-β1表达，进而达到其治疗目的，尚无报道。本研究即采用单肾切除链脲佐菌素（STZ）诱导大鼠糖尿病肾病模型，观察川芎嗪对其小管间质损害及转化生长因子-β1表达的干预，为其防治DN提供理论依据。 　　 1 材料与方法 　　1.1 动物　　 　　60只雄性清洁级Wistar大鼠（成都中医药大学实验动物中心提供），重量200～220 g。所有大鼠置于空气流通，温度18～25，湿度40%～70%的环境中，给予12 h光照，自由进食、饮水。标准化饲养房笼子驯化喂养1周，实验前禁食1 d。 　　1.2 药品与试剂 　　盐酸川芎嗪片（50 mg/ 片）由北京市燕京制药厂生产(批准文号：国药准字；贝那普利由北京诺华制药有限公司生产（批准文号：国药准字；STZ购自Sigma公司；鼠抗人TGF-β1单克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司。 　　1.3 动物模型及分组 　　1.3.1 糖尿病肾病模型的建立 　　将60只大鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠40mg/kg麻醉后，常规消毒，从距右脊肋骨1.5 cm处斜向外方切口，于腹膜外暴露肾脏并剥离肾脏周围的脂肪组织，行右侧肾脏切除术。整个手术过程遵循无菌操作原则。术后2周，将其随机分为两组：正常手术组（n=12）和糖尿病模型组（n=48）。糖尿病模型组于禁食12 h后一次性腹腔注射STZ（纯度99.7%），临用前将STZ溶于0.1 mol/L，pH 4.2的无菌枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液中，终浓度为1%（冰浴中新鲜配制，随配随用），按60 mg/kg体重的剂量进行单次腹腔内注射，72 h后，尾静脉采血，测空腹血糖浓度＞16.7 mmol/L，尿糖阳性（与正常组比较P＜0.05），确定造模成功。 　　1.3.2 分组及治疗 　　将造模成功糖尿病模型组48只大鼠随机分为4组：模型组（n=12），贝那普利对照组（n=12），川芎嗪低剂量组（n=12），川芎嗪高剂量组（n=12）；另设正常手术组12只，共5组动物。除模型组外，其余各组按组别每只分别予以贝那普利1.7 mg/（kg·d），川芎嗪50，150 mg/（kg·d），生理盐水灌胃2 ml，共12周。 　　1.4 观察指标及方法 　　1.4.1 空腹血糖(FPG)、肾功能［包括尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）］测定各组大鼠分别于治疗前和治疗后第6周与第12周，采用快速血糖仪与全自动生化分析仪检测。 　　1.4.2 UAER测定 　　于治疗第4，8，12周各检测1次。 　　1.4.3 肾脏病 理学 观察 　　于实验第12周将大鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠40 mg/kg麻醉后，常规消毒，于腹膜外暴露肾脏并剥离肾脏周围的脂肪组织，摘取肾脏，常规固定，HE染