建立21味寒水石散中没食子酸的含量测定方法.docVIP

建立21味寒水石散中没食子酸的含量测定方法 【关键词】 21味寒水石散；,,没食子酸；,,含量测定；,,高效液相色谱法 　　摘要：目的建立21味寒水石散中没食子酸的含量测定方法。方法采用高效液相色谱（HPLC）法测定21味寒水石散中没食子酸的含量，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇水（595）为流动相，检测波长为274 nm。结果线性范围0.020 6～0.247 2 μg，平均回收率为99.1%，RSD=1.3% (n=9)。结论该方法简便、准确，提供了21味寒水石散中没食子酸的质量控制方法。 　　关键词：21味寒水石散； 没食子酸； 含量测定； 高效液相色谱法 　　21味寒水石散为一藏药，藏药名为“木布玉杰日布”。主要有寒水石（奶制）、诃子、余甘子、藏木香、木香、木瓜等21味药材组成，具有制酸，止痛之功效。主要用于培根木布引起的呕吐酸水，胃部刺痛，大便干燥等症［1］。没食子酸又称五倍子酸，在藏药材诃子、毛诃子、余甘子等中含量丰富，其在21味寒水石散中的含量测定未见报道。没食子酸含量测定方法有光谱法［2］、比色法［3］、薄层色谱(TLC)［4］和HPLC法［5］等，本文采用高效液相色谱(HPLC)法，制定出该制剂中没食子酸的含量测定方法。 　 　1 仪器与试药 　　1.1 仪器Agilent 1100型高效液相色谱仪，DAD检测器，Agilent 1100色谱工作站；Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm，大连依利特 科学 仪器有限公司）色谱柱；KQ3200超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；TG328A电光分析天平（上海天平仪器厂）。 　　1.2 试药甲醇（色谱纯）；没食子酸对照品（由 中国 科学院西北高原生物研究所胡凤祖副研究员提供，经归一化检测，含量大于99％）；21味寒水石散（青海藏 医院 ）。 　　2 方法与结果 　　2.1 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品适量，加甲醇制成20.6 μg/ml的对照品溶液。 　　2.2 供试品溶液的制备精密称取样品2.0 g，精密加入甲醇100 ml，称定重量，超声提取1 h，放冷，用甲醇补足减失的重量，过滤，弃去初滤液，续滤液过0.45 μm滤膜，即得供试品溶液。 　　2.3 空白样品溶液的制备将处方中含没食子酸的药材如诃子、余甘子等去除后，按供试品溶液的制备方法制备。 　　2.4 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18柱；流动相：甲醇水（595）；流速：1.0 ml/min；检测波长：274 nm；柱温：30；进样量：5 μl。在此条件下，没食子酸与其它峰分离效果较好，样品与对照品在同一保留时间有相同的波峰出现，而空白溶液则无相应的峰，证明空白样品不干扰，含量测定专属。结果见图1~3。 　　2.5 线性关系实验精密吸取对照品溶液1，3，6，10，12，15，18 μl进行测定，以峰面积积分值为纵坐标，没食子酸进样量（μg）为横坐标，回归方程为：Y＝9 219X+6.051，相关系数r＝0.999 7。结果表明，没食子酸在0.020 6～0.247 2 μg之间呈良好的线性。 [NextPage] 　　2.6 精密度实验取对照品溶液5 μl，重复进样6次，根据测得的峰面积积分值 计算 ，RSD为1.0％。 　　图1 对照品HPLC色谱图(1.没食子酸) (略) 　　图2 样品HPLC色谱图(1.没食子酸)(略) 　　2.7 重复性实验精密称取样品2.0 g，共6份，按2.2所述方法处理，按上述色谱条件进样测定，结果重现性良好，样品中没食子酸含量的RSD为1.9％。 　　2.8 稳定性实验 按2.2所述方法处理样品1份，按上述色谱条件测定，间隔2 h/次，结果12 h内稳定性良好。 　　图3 空白样品HPLC色谱图(略) 　　2.9 回收率实验 取样品约2.0 g（n=9），精密称定，加入一定量的没食子酸对照品。按2.2所述方法处理并依法测定，计算回收率结果。见表1。 　　表1 回收率实验结果(略) 　　2.10 样品测定取3批成药样品，按2.2所述方法制备成供试品溶液，按上述色谱条件进行分析，按外标法以峰面积积分值 计算 ，求得样品中没食子酸的含量（每批样品测3次取平均值）分别为0.074％、0.073％和0.073％。 　　3 讨论 　　3.1 检测波长确定 对没食子酸对照品溶液在200～400 nm范围内进行扫描，测得其在220 nm和274 nm有最大吸收，比较相同条件下样品于220 nm和274 nm波长下的色谱图，检测波长为274 nm的色谱图，分离效果好，且杂质干扰少，因此，采用274 nm为检测波长。 　　3.2 提取方法确定 比较了不同提取方法对提取率的影响，考虑提取时间和方法的简便性，采用超声1