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异常黑胆质成熟剂总黄酮和总酚的含量测定 作者：木拉提·克扎衣别克 阿不都热依木·玉苏甫 哈木拉提·吾甫尔 【摘要】 目的检测异常黑胆质成熟剂中总黄酮和总酚的含量。 方法以芦丁为对照品，采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法测定了总黄酮含量；以没食子酸为对照品，采用Folin-Ciocalteu比色法测定了总酚含量。结果芦丁浓度在0.011～0.130 mg/ml范围内线性关系良好，最低检测限为0.06 μg/ml，最低定量限为0.18 μg/ml。该方法加样回收率为95.1%～97.5%，精密度为1.34%，水提物和醇提物中总黄酮含量分别为16.2 mg/g和19.0 mg/g。没食子酸浓度在1.1～7.7 μg/ml范围内线性关系良好，最低检测限为0.01μg/ml，最低定量限为0.03 μg/ml。该方法加样回收率为99.5%～104.8%，精密度为3.39%，水提物和醇提物中总酚含量分别为38.28 mg/g和21.54 mg/g。结论此两种方法灵敏、准确性强，精密度高，重复性好，分别可以用作异常黑胆质成熟剂中总黄酮和总酚含量的测定。 【关键词】 异常黑胆质成熟剂 总黄酮 总酚 含量测定 异常黑胆质成熟剂是维吾尔医常用复方制剂，由破布木Cordia dichotoma Forst.，红枣Ziziphus jujuba Mill.，甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.，牛舌草Anchusa italica Retz.，小茴香Foeniculum vulgare Mill.，地锦草Euphorbia humifusa Willd.等药材组成,用于 治疗 由异常黑胆质所导致的肿瘤、糖尿病和心血管疾病等。 现代 研究已证实，异常黑胆质成熟剂可清除自由基、提高患者抗氧化功能、保护羟自由基引发的DNA氧化损伤和线粒体氧化损伤等，具有较强的抑制HepG2细胞体外生长、抑制HepG2细胞DNA、RNA和蛋白质生物合成等作用。以往的研究结果还表明，异常黑胆质成熟剂的总黄酮部位能明显抑制癌细胞生长、诱导癌细胞凋亡及调控凋亡基因表达等［1～3］。研究报道破布木、地锦草、甘草、牛舌草等含丰富的黄酮类化合物外，还含有其他非黄酮类多酚化合物［4～7］。本文采用分光光度法对异常黑胆质成熟剂水提物总黄酮及总酚含量测定的方法进行了系统研究。现报道如下。 　　1 器材 　　1.1 药材 组成异常黑胆质成熟剂复方制剂的每味药材均购自新疆维吾尔医 医院 制剂中心，并由该中心鉴定。 　　1.2 仪器 Cintra 40紫外可见分光光度计(澳大利亚GBC 科学 仪器公司)；Sartorius BS110S精密 电子 天平（德国Sartorius）；旋涡振荡器；离心机。 　　1.3 试剂 芦丁标准品购自 中国 药品生物制品鉴定所，批号为0080-9705；没食子酸购自天津市光复精细化工研究所，批号其它试剂均为A.R 级。 　　2 方法与结果 　　2.1 总黄酮的测定 　　2.1.1 样品溶液的制备 精密称取异常黑胆质成熟剂干燥粉末0.5 g，置10 ml具塞试管中，加入4 ml沸水，搅拌，充分溶解后加入无水乙醇6 ml，置于漩涡振荡器上振荡3 min，4 000 r/min离心5 min，取上清液；沉淀物再加沸水4 ml，搅拌，充分溶解后加入无水乙醇6 ml，置于漩涡振荡器上振荡3 min，4 000 r/min离心5 min，取上清液；两次上清液合并，置于25 ml容量瓶中，加60%乙醇至刻度，备用。 　　2.1.2 对照品溶液的配制 精确称取已烘干至恒重的芦丁标准品（纯度≥98%）18.6 mg，置于50 ml容量瓶中，用60%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（每毫升含无水芦丁0.372 mg）。 　　2.1.3 氢氧化钠溶液及乙醇用量的选择 本实验室用比色法进行异常黑胆质成熟剂水提物中黄酮含量测定时发现若按照常规的比色法进行测定样品溶液中会出现一些随时间延长逐渐增多的红色絮状的漂浮物，造成吸光度显著波动，影响测定结果的稳定性、准确性和重复性，发现仅含相同浓度显色试剂和乙醇的空白溶液同样有絮状物(白色)存在，因此可以认为这种现象是由溶液中氢氧化钠、水和乙醇三元体系不适当配比所造成，而不是样品中含有的干扰性杂质引起，这种在乙醇的盐析作用下析出的氢氧化钠絮状物因孔隙多具有很强的吸附能力，将溶液中的有色物质吸附在其表面上，从而产生红色絮状的漂流物，造成总黄酮浓度的测定结果偏高且不稳定。通过将4%氢氧化钠溶液的用量从4 ml减到2 ml并选择水作为补充溶剂，彻底排除了红色絮状物，大大改善了总黄酮测定方法的稳定性和准确度（见图1）。实验结果还表明，氢氧化钠溶液新调整的用量仍为过量，完全