微生物来源的Xa因子抑制剂F022172的研究.docVIP

微生物来源的Xa因子抑制剂F022172的研究 作者：路新华 郑智慧 马瑛 石英 董悦生 任晓 穆栋 张华 贺建功 【摘要】 利用一种由本中心建立的Xa因子抑制剂高通量体外筛选模型，从大量真菌菌库及其来源的代谢产物中筛选到了一株可产生阳性活性化合物的菌株F02ZA2172，该菌株的发酵液经有机溶剂提取、硅胶柱色谱、ODS柱色谱、Sephadex LH20柱色谱及HPLC制备分离，得到F022172A、B和C三个活性化合物。经紫外、质谱、核磁等理化数据 分析 ，确定这三个化合物分别与已知化合物6epiophiobolin K、ophiobolin K和ophiobolin G的结构相同，但该类化合物对Xa因子的抑制活性至今未见报道。 【关键词】 微生物 Xa因子抑制剂 二倍半萜 F022172, factor Xa inhibitors from metabolites of microorganisms ABSTRACT A high throughput screening model was established for screening factor Xa inhibitors from thousands of strains of fungi, as a result, a strain, F02ZA2172 with potent suppression activity was isolated. The culture broth of it was processed by solvent extraction, silica column chromatography, Sephadex LH20 column chromatography and ODS HPLC preparation to obtain three pure active compounds named F022172A, B and C. ThEir chemical structures were elucidated as the compounds named 6epiophiobolin K, ophiobolin K and ophiobolin G by physicochemical properties and spectral data of UV, MS, 1HNMR and 13CNMR respectively. The compounds are reported as factor Xa inhibitors for the first time. KEY WORDS Microorganisms; Factor Xa inhibitor; Sesterterpenes 血栓的形成是心血管疾病(如心肌梗死、中风、深度静脉血栓、肺栓塞等)重要致病因素，抗血栓 治疗 一直是这类疾病抢救措施及预防策略的核心，其中抗凝血是抗血栓治疗的重要 方法 之一，因此，寻找更加安全、高效的抗凝血药物在临床治疗上具有重要的意义。 Xa因子(factor X activated，factor Xa)是一种丝氨酸蛋白酶，位于血液凝集级联的上游，处在连接内源性和外源性激活途径共同通路的中心位置，Xa因子抑制剂既能阻断内源性凝血亦能抑制外源性凝血的发生［1］。Xa因子是凝血酶生成的限速成分，由于在血液凝集级联反应过程中还存在生物信号的放大，估计一个Xa因子抑制剂分子能抑制138个凝血酶分子的生理效果， Xa因子抑制剂可能比凝血酶抑制剂更为有效［2］。Xa因子只单纯促进凝血，没有凝血酶抑制剂的副作用，因此，Xa因子抑制剂成为近年来抗凝血药物 研究 的热点之一，有些药物已经上市［如Organon公司和SanofiSynthelabo公司共同开发的磺达肝素钠(fondaparinux sodium，商品名：方达帕鲁)于2001年12月在美国获得FDA批准［3］］或正在开发中［4］。 本实验室建立了一个快速的高通量筛选方法，从大量土壤真菌代谢产物中筛选Xa因子抑制剂，筛选得到阳性菌株F022172。本文报道其发酵、分离、结构鉴定和生物学活性。 1 材料与方法 1.1 筛选用微生物的菌株 真菌菌株由本中心从云南和新疆采集的土壤中分离得到。 1.2 试剂及仪器 Xa因子和底物MCA(BocIleGluGlyArg7amido4methylcoumarin hydrochloride)购自美国Sigma公司；色谱乙腈购自Merck公司；Victor2多标计数仪(美国PE公司)；中压层析系统(德国BUCHI公司)；高效液相系统(美国Waters公司515泵和PDA检测器)；高效液相柱Phe