构建IL-2优化的免疫球蛋白抗淋巴瘤基因疫苗.docVIP

构建IL-2优化的免疫球蛋白抗淋巴瘤基因疫苗 作者：刘辉　常乃柏　顾惜春　朱平 【摘要】 　　本 研究 构建白介素2（IL-2）基因与免疫球蛋白重链可变区（IgHV）基因共表达的基因疫苗。从淋巴瘤患者外周血获得免疫球蛋白基因IgHV片段，将其与IL-2基因连接后形成的融合基因克隆到真核表达载体中。表达载体通过脂质体转染COS细胞， 用ELISA法检测IL-2的表达。结果显示：本研究成功构建了IgHV基因与IL-2基因的融合基因表达载体。在IgHV-IL-2/ pcDNA3.0中IL-2可以获得正确表达。结论： 本研究构建的IL-2和IgHV的融合表达载体可以在COS细胞中分泌表达IL-2。 【关键词】 基因疫苗　白介素2 淋巴瘤 　　Construction of Fusion Gene Between IgGHV and IL-2 as IgHV NuclEic Acid Vaccine Against Lymphoma 　　Abstract The purpose of this study was to construct the IgHV and IL-2 coexpressed vector. The IgHV gene fragments were obtained from the peripheral blood of patients with lymphoma, and were cloned into eukaryotic expression vector. Meanwhile, the gene fragments of IgHV linked with gene of IL-2 were inserted into pcDNA3.0 to form a fusion gene of IgHV-IL-2. Then fusion genes were transfected into COS cells by Lipofectin and the expression of IL-2 was detected by ELISA. The results showed that the IgHV/pcDNA3.0 expression vector was successfully constructed. The 3′ end of IgHV was linked to IL-2 gene, and IL-2 could be correctly expressed. In conclusion, the expression vector of IgHV-IL-2 can express IL-2 correctly in COS cells. 　　Key wordsgene vaccine; IL-2; Lymphoma 　　在淋巴瘤的 治疗 中放疗和化疗起着非常重要的作用，但放疗和化疗都伴有较严重的副作用，寻找副作用小并能根治淋巴瘤的 方法 一直是研究的热点，特异性免疫治疗的 发展 为淋巴瘤患者提供了希望。利用淋巴瘤表面特有的免疫球蛋白独特型作为抗原制备的DNA疫苗能够诱导机体产生抗淋巴瘤的免疫反应。但DNA疫苗在体内不能自我复制，转化效率低，故DNA疫苗的免疫效率难以令人满意，寻找合适的免疫佐剂是增强基因疫苗免疫活性的重要手段。IL-2是一种重要的T细胞生长因子，在控制辅助T细胞的分化上起关键作用，能增强天然杀伤细胞（NK）,细胞毒T细胞（CTL）的功能，促进T细胞增殖和干扰素（IFN）的产生。给予抗原后注射IL-2可增强免疫反应，但细胞因子具有多效性，全身给予治疗量的细胞因子虽然可以增强免疫反应，但副作用较多。注射编码细胞因子的质粒可在免疫反应的局部持续释放低剂量的细胞因子，这样既可增强免疫反应，又能减轻毒性。因此构建IL-2和特定抗原的共表达载体可能是提高DNA疫苗效率的有效途径。 文献 报道，同时表达IL-2的DNA疫苗比不表达IL-2的疫苗免疫效应高出100倍［1］。为此，本研究克隆了免疫球蛋白重链可变区（IgHV）基因片段，构建IgHV与细胞因子IL-2的共表达载体，观察其在COS细胞中分泌表达IL-2。 　　材料和方法 　　IgHV真核表达载体的构建 　　从1例淋巴瘤患者外周血中构建免疫球蛋白基因IgHV克隆［2］，上游引物设计在IgHV的引导区内，5′ 端设计了Kozak序列及KpnI的酶切位点；下游引物设计在它的FR3区，5′ 端设计了终止密码子及EcoRI的酶切位点，序列如下（本实验所用引物均由上海博亚生物技术有限公司合成）：VH上: 5′-TAT AGGTACCACCATGGAGTTTGGGCTGAGCTG-3′，VH下：5′-TTAAGAATTCCTAAGTCGC