浅谈结核病的实验室辅助诊断IgG抗体检测法.docVIP

浅谈结核病的实验室辅助诊断IgG抗体检测法 浅谈结核病的实验室辅助诊断IgG抗体检测法 　　结核病是由结核分枝杆菌引起的一种慢性传染病，全身各器官均可发生，但以肺结核最为多见，目前肺结核的经典诊断方法主要有：痰涂片法、培养法、皮试法等，有的时间长，有的检出率低，而结核分枝杆菌IgG抗体检测法，即简便、又快捷，它通过检测人体血清中的特异性LAM、16KD、38KD抗体来诊断结核病，特别是肺外结核。 论文联盟wWw.LW 　　1对象与方法 　　1.1所有患者均为我院2010年1月-2010年6月住院患者，其中男性425例，女性575例，年龄12-65岁。 　　1.2对照组：为我院2010年1月-2010年6月，门诊健康患者，其中男性152例，女性148例，最终确认无结核病感染者。 　　1.3方法：在芯片上标上样品编号，在其窗口滴加200ulA使膜表面完全浸湿，待完全渗入后，室温放置一分钟，将完全渗入后及时滴加300ul试剂B，然后同上滴加500ul试剂C，最后滴加300ul试剂D，反应完毕后，将芯片和校正光盘分别放入生物芯片识别仪相应位置进行分析。 　　1.4样本要求：静脉血清体积不少于150ul，溶血样本和高脂血样本不宜，新鲜血样在2-8环境下存放不要超过48小时。 　　2统计学处理 　　SAS统计软件对实验数据进行统计。 　　3检验原理 　　结核分枝杆菌IgG抗体检测试剂盒（蛋白芯片）由芯片和试剂两部分组成。芯片以微孔滤膜为载体，同时将结核菌的特异性细胞壁脂多糖抗原LAM和经基因工程重组DNA技术生产纯化的结核菌16KD和38KD特异性抗原固定在特制的载体上，利用微孔滤膜的浓缩、凝集、渗滤作用，捕捉被检样品中特异性抗体，使抗原抗体反应在固相膜上快速进行，复合物再与胶体金标记的抗人IgG作用，在膜上形成紫红色的斑点。最后通过生物芯片识别仪进行结果分析。本品分别测定抗结核菌的特异性细胞壁脂多糖LAM抗体、16KD抗体和38KD抗体，如一种抗体阳性，则判断该患者抗结核分枝杆菌抗体阳性，判定结果用于结核菌感染的临床辅助诊断。 　　4主要组成成分 　　产品组成内容主要活性成份数量备注芯片芯片反应板TB抗原20人份试剂试剂A试剂B试剂D试剂C2%吐温，Tris缓冲液金标抗人IgG1瓶1瓶1瓶2瓶校正光盘1张产品使用 　　说明书 　　 　　1份 　　不同批号试剂盒中的各组份不可以互换5注意事项 　　5.1本产品仅用于体外诊断。 　　5.22~8环境取出的芯片和试剂须在室温下平衡10分钟后方可使用。 　　5.3采取血样前病人无须禁食。 　　5.4每盒芯片配套1张校正光盘，此光盘只对该盒内的芯片有效，不能与其它盒内的芯片配套使用。 　5.5芯片反应窗口中的膜不能损伤或受潮。 　　5.6芯片应在有效期内使用。若阳性控制点不显色说明芯片已经失效。取一新的芯片重做。 　　5.7 残余的标本与使用过的芯片按生物危险品进行消毒处理。 　　5.8操作时要戴手套，检测完毕彻底洗手。 　　5.9如不慎将任何试剂接触眼部，立即用大量清水冲论文联盟wWw.LW洗。清洗后如仍有不适，请即就医。 　　6结果 　　6.1LAM、16KD、38KD、IgG抗体有任一指标为阳性时均确定为结核分枝杆菌感染。 　　6.2LAM、16KD、38KD、IgG抗体均为阴性时，提示未感染结核杆菌。 　　6.3其阳性结果率：住院患者79.3%，门诊健康患者阳性率为0%，无一假阳性。 　　6.4其中20.7%的阴性患者中，仅有2%的患者最终确诊感染结核分枝杆菌。 　　7讨论 　　近年来，结核病的发病呈上升趋势，所以准确、快速的为临床提供辅助诊断，显得尤为重要结核分枝杆菌IgG抗体快速的同时，也存在局限性，本品只能用于血清样品的测试，溶血样本及高脂样本不宜。极少数重症结核病患者由于免疫功能极度低下，可能无法检出抗体。 　　但其最低检出量参考品14稀释后的灰度值1.010，精密性参考品检测CV15%。所以可以通过IgG抗体的检测来诊断结核分枝杆菌。 　　参考文献 　　[1]Raja.A Immunology of tuberculosis[J] Zndian J Med Res,2004,120(4):213 　　[2]Chan ED,Reves R,Belisle.IT,et.Diagnosis of tubexculosis by a visually dete ctable immunoassay for lipoarabinomannan[J].Am J Respir Crit Care Med,2000,161(5) 　　[3]汪伟明，周国平，张钢,等.血清LAM-IgG抗体对结核病的诊断价值.江苏医药，2000，