第一章 小肠上皮细胞培养.pptVIP

肠上皮细胞培养技术 报告人：欧阳万金 肠上皮细胞 肠上皮细胞（intestinal epithelial cells,IECS）是具有极性的柱状上皮细胞，参与肠道的消化、吸收、分泌、免疫屏障和应激反应等，黏膜上皮内含有大量的免疫细胞和免疫分子，是机体内最大的免疫组织。 IEC是体内更新最快的一类细胞，对维持肠上皮的功能有重要作用。其快速更新的特性，使其成为研究细胞增殖和分化调控机制、营养素对肠上皮的作用、细胞信号转导、肠道免疫等提供了理想的体外模型。 准备工作 1、对所需用到的器皿的清洗、干燥、消毒 2、培养基和其他试剂的配制、分装及灭菌 3、无菌室或超净台的清洁与消毒 4、培养箱及其他仪器的检查与调试 IEC的培养流程 IEC的培养分为原代培养和传代培养。 分离细胞后立即进行培养称为原代培养，一般将培养的第1代与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养； 存活的原代培养细胞（细胞株）进行传代，称为传代细胞培养。 影响IEC培养的因素 1、材料来源 以取自刚出生且未进奶的新生大鼠最好。 对已进食的新牛大鼠，分离培养过程中使用的培养液、细胞洗涤液(Hanks液)和组织分散液中均应加入2倍浓度的抗生素。 2、消化酶的选择 用0．25％胰酶消化组织，室温下需约1 h，分离得到的大部分为单个细胞，贴壁和生长能力均较差。 胶原酶Ⅺ与中性蛋白酶I的联合使用，室温消化约40 min即可得到IEC团