实验二酵母蔗糖酶教学.pptVIP

实验二、酵母蔗糖酶的提取和酶活测定 实验目的 学习提取酵母蔗糖酶和测定酶活力的方法； 学习提取生物活性大分子的方法。 实验材料 材料：活性干酵母粉、石英砂； 试剂：95％冰乙醇、DNS液、PBS（pH7.2）、 5％蔗糖溶液、1N NaOH溶液； 仪器：水浴锅、高速冷冻离心机、722型分光 光度计。 实验原理 蔗糖酶的提取过程和酶活的测定方法； 蛋白质等生物活性大分子的提取方法。（自学） 提取工艺和酶活测定 蔗糖酶 蔗糖酶的耐热温度为50度，45度以下可保持酶活不变；在pH3.0~8.0范围内均可保持较高的酶活； 蔗糖酶的活性中心有巯基，因此在提取时应防止其被氧化，或者加入还原剂（如Vc）保持酶活力； 酵母细胞存在两种蔗糖酶，一种在细胞壁中，一种在细胞质内，前者活力较高，分子量较大（约270KDa），后者活力较低，分子量约为135KDa，两种酶的底物专一性和动力学性质十分相似，因此，本实验未区分内酶与外酶。 提取工艺 1. 破碎酵母细胞的方法： 蔗糖酶分子量较大，一般采用研磨法彻底破碎细胞使其释放出来，但应注意研磨过程中保持低温防止酶失活； 或者采用自溶法（适当的酸度和温度下利用酵母菌自身的酶系破坏细胞壁），此方法较为温和，但是时间较长，需加入少量防腐剂，防止过程中外界细菌污染；