91-特异性抗体的制备.pptxVIP

特异性抗体的制备;第一节免疫原的制备;;二、可溶性抗原的制备 1.细胞破碎：细胞可溶性抗原可分为：细胞膜蛋白抗原、细胞浆抗原、细胞核及核膜抗原。三种抗原的制备均需细胞破碎，细胞破碎有如下方法： A 反复冻融法：置-15~-20 ℃冻结，然后缓慢融化，反复2次，大部分细胞因胞内冰晶的形成和溶剂浓度的突然改变而被融破。此法适用于组织细胞，对微生物的细胞作用较差。 B 冷热交替法：将材料投入沸水中，90 ℃左右维持数分钟，立即置于冰浴中。在细菌或病毒中提取蛋白质及核酸可用此法。; C 超声波破碎法：是利用超声波的机械振动而使细胞破碎的方法。注意避免长期超声产热。微生物和组织细胞破碎多用此法，但真菌厚膜孢子则较难打破。 D 酶处理法：酶在一定的条件下能消化细菌和细胞。例如在碱性(pH8.0)下，溶菌酶可专一破坏G+菌细胞壁。此法适用于多种微生物。 E 表面活性剂处理：在一定的条件下，表面活性剂能与细胞膜脂蛋白形成微泡，使膜的通透性发生改变而使细胞破碎。提取核酸时常用此法。 F 自溶法：利用组织和微生物的自身酶系，在一定条件下使细胞溶解。;2. 蛋白质抗原的制备：破碎的细胞按一定要求纯化，可获得不同成分的抗原。蛋白质抗原的制备可采用如下几种方式进行纯化： ⑴超速离心法：利用各抗原在梯度液中沉降速度不同，离心后使具有不同沉降速度的颗粒处于不同密度的梯度层内，达到区带分离的目的。这是分离亚细胞部