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蛋白表达概述 Michael Chao 常用蛋白表达系统(host) 原核细胞：大肠杆菌。 真核细胞：酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞 大肠杆菌表达系统 大肠杆菌是基因工程研究中采用最多的原核表达体系。 优越性： ①对大肠杆菌的基础生物学、分子遗传学等背景知识和基因表达的调控机理已有了深刻了解； ②商品化的载体和菌株种类非常齐全； ③表达效率高； ④易培养，成本低。 缺点： ①因分泌能力不足，真核蛋白质常形成不溶性的包含体； ②蛋白质不能糖基化； ③其内毒素很难除去。 酵母表达系统 甲醇酵母表达系统是目前应用最广泛的酵母表达系统，以Pichia Pastoris应用最多。 优越性： ①蛋白可糖基化，有相对正确的天然结构，可很好的生产分泌型蛋白； ②表达载体为整合型质粒，载体中含有与酵母染色体中同源的序列，因而比较容易整合入酵母染色体中，实现高效率表达； ③表达载体都为E.coli/Pichia Pastoris的穿梭载体，可在获得克隆后采用E.coli细胞大量 扩增。 ④易培养，成本低,可高密度发酵。 缺点： ①糖基化与哺乳动物有所差别； ②培养上清多糖浓度高，不利于纯化。 昆虫细胞表达系统 利用重组杆状病毒在昆虫细胞体系中表达外源蛋白是目前较为流行的表达方式。 优越性： ①重组蛋白具有完整的生物学功能，如蛋白的正确折叠、二硫键的搭配； ②可容纳较大片