毛细管电泳间接化学发光法分离检测儿茶酚胺和儿茶酚.pdf

第$$ 卷 分析化学 （862LM DN5LN6 ） 研究简报 第) 期 *%%1 年) 月 7E=G@O@ P,9QG;- ,R 5G;-ST=A;- 7E@+=OTQS ((11 K ((1 毛细管电泳! 间接化学发光法分离检测儿茶酚胺及儿茶酚 # 李欣欣 胡涌刚 杨泽玉 （华中科技大学环境科学与工程学院，武汉#$%%# ） 摘 要 根据儿茶酚胺及儿茶酚淬灭铁氰化钾!鲁米诺体系发光的原理，利用毛细管电泳!化学发光联用技术 分离测定了$ 种儿茶酚胺和儿茶酚，并优化了检测和分离条件。在最佳条件下，测得多巴胺、肾上腺素、去甲 肾上腺素和儿茶酚的检出限分别为% ’ $$ 、(’ ) 、* ’ # 和% ’ (* !+,-. / 。本方法具有一定的选择性，对于医用注射 液及尿样在未经预处理条件下可直接进行分离分析，结果令人满意。 关键词 毛细管电泳，化学发光，儿茶酚胺，尿样 ! 引 言 多巴胺（45 ）、肾上腺素（6 ）和去甲肾上腺素（26 ）等儿茶酚胺（75 ）作为神经递质和激素与人们的 健康密切相关［(］，分离和测定生物样本中的痕量儿茶酚胺，对于研究其生理功能、与之有关的疾病诊断 和药物及手术疗效的鉴定都具有重要意义。毛细管电泳（76 ）是一种高效、快速的分离分析方法，目前， ［* ，$ ］ ［# ，1 ］ 毛细管电泳技术用于儿茶酚胺类物质的分析主要采用紫外可见吸收 、激光诱导荧光 、化学发 光［3 ， ］等检测方式。由于生物样品成分复杂，因此，实际样品通常需要经过渗析、离心及固相微萃取等 预处理后才能用于76 分离分析。本实验根据在碱性条件下儿茶酚胺及儿茶酚猝灭铁氰化钾!鲁米诺 体系发光反应的原理，结合毛细管电泳分离技术，在优化条件下，实现了$ 种儿茶酚胺、儿茶酚标准样品 及未经预处理的$ 种临床药物和实际尿样的在线分离分析。 # 实验部分 # ’ ! 仪器与试剂 高压电源（上海原子能研究所）；光电倍增管（北京滨松光子技术有限公司）；石英毛细管（河北永年 光纤厂）；直流前置放大器（南京大学微弱信号检测中心）；2!*%%% 型色谱工作站（浙大智达信息工程有 限公司）。鲁米诺（8-9:; 公司）；生化试剂：肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺（=+; 公司）；? 8@（72 ）、 $ 3 儿茶酚、四硼酸钠均为国产分析纯试剂。所用水为二次蒸馏水。 # ’ # 毛细管电泳!化学发光检测装置 自组装毛细管电泳!化学发光装置与文献［) ］相似，将电泳毛细管（11 A+ B 1% !+ =’ C’ ）一端经D8 刻蚀(’ 1 E 后，将# A+ 长的刻蚀段插入反应管（(1 A+ B 1$% !+ =’ C’ ）中。距反应管端( A+ 段烧去聚酸 亚胺涂层作检测窗（电泳管的末端插入其中）。一根试剂管（*1 A+ B *%% !+ =’ C’ ）以重力方式（高差 *% A+ ）引入试剂。毛细管均用聚四氟乙烯三通接头固定，反应管以垂直方式通过一浅槽穿过光电倍增 管，使检测窗对正光电倍增管入射窗，两个缓冲池和光电倍增管密封于暗箱中以降低背景噪声。毛细管 分别用% ’ ( +,-. / 2;FD 和% ’ ( +,-. / D7- 及蒸馏水冲洗(% +=G ，再用电泳缓冲液平衡( E 。电泳分离的 介质是(1 ++,-. / 硼砂溶液（HD I 0 ’ 1 ，含有* B (% J $ +,-. / 的鲁米诺）；柱后试剂：( B (% J # +,-. / ? 8@（72 ），HD I ($’ $ 。 $ 3 $ 结果与