新生乳大鼠心肌细胞培养资料.pdfVIP

新生乳大鼠心肌细胞 原代培养及纯化鉴定 威斯腾生物技术中心 研究目的 • 心脏病是一类比较常见的循环系统疾病。 • 循环系统由心脏、血管和调节血液循环的神经体液组织构 成，循环系统疾病也称为心血管病。 • 如：冠状动脉粥样硬化性心脏病、风湿性心脏病、高血压 性心脏病、肺源性心脏病、感染性心脏病、内分泌性心脏 病、血液病性心脏病、营养代谢性心脏病等。 研究心肌细胞体外培养非常重要！！！ 心肌细胞原代培养步骤： • 1.取出生7天内新生乳大鼠，无菌条件下开胸取心尖部位，用预 冷的PBS溶液润洗3遍。 • 2.将组织剪碎，加入0.125%的胰酶，在37度恒温水浴锅中，采 用分次消化，每次消化5分钟，一共消化8~10次。 • 3.每次消化后取上清液，并加入等量的含10%的DMEM/F12培 养基，轻轻混匀，中和胰酶的消化，防止消化多度。最后 1000R/MIN离心5分钟。离心后收集沉淀，用PBS再次重复离 心3次。 • 4.最后离心后的细胞即为心尖部原代分离的单细胞。加适量培 养基，于培养箱中培养。 心肌细胞的纯化 • 主要是去除心肌成纤维细胞 • 1.差速贴壁法：心肌成纤维细胞先贴壁，所以在培养90分 钟左右，将未贴壁的细胞悬液吸出。此时已经贴壁的是心 肌成纤维细胞。 • 2.用BRDU筛选：上述步骤中吸出的未贴壁的细胞，在继 续培养前，加入终浓度为0.1mmol/LBRDU，可抑制心肌 成纤维细胞的生长。 心肌细胞的特点 • 1.与心脏组织一样可观察到搏动 • 2.不能传代，其搏动率在培养第4天达到最大，第7天后逐 渐消失。 • 3.纯度不能达到100% 心肌细胞体外培养的特点 • 正常的心脏组织收缩 心肌细胞体外培养的特点 • 体外培养的心肌细胞收缩 /v_show/id_XNDY0NjY1NDQ=.html 心肌细胞的鉴定 • 鉴定手段： 免疫组化/免疫荧光/流式表面抗原检测 谢 谢 ！