黄颡鱼长型肽聚糖识别蛋白（pfPGRP-L）原核表达和多克隆抗体的制备.pdfVIP

江西农业大学学报 2016，38(4)：723—728 http：／／xuebao．jxau．edu．cn ActaAgfieulturaeUniversitatisJiangxiensis DOI：10．13836／j．jjau．2016103 杨竹青，钟烈鹏，刘毅，等．黄颡鱼长型肽聚糖识别蛋白(pJPGRP-L)原核表达和多克隆抗体的制备[J]．江西农业大学学报， 2016，38(4)：723—728． 黄颡鱼长型肽聚糖识别蛋 白(pfPGRP-L) 原核表达和多克隆抗体的制备 杨竹青 ，钟烈鹏 ，刘 毅 ，王 自蕊 ，熊六凤 ，隗黎丽 (1．江西农业大学 动物科学技术学院，江西 南昌 330045；2．江西师范大学 生命学院，江西 南昌 330022) 摘要：为进一步研究肽聚糖识别蛋白(peptidoglycanrecognitionproteins，PGRPs)在先天性免疫应答中的生物学 功能，在前期克隆黄颡鱼长型肽聚糖识别蛋白(pJPGRP—L)cDNA全长的基础上 ，根据p／PGRP—L基因中高亲 水性区域序列设计特异性引物扩增出编码序列，将该基因片段克隆到 pGEX-4T-1质粒，构建重组表达载体。 SDS电泳检测该 目的蛋白大小约为5lku，与理论值大小符合，回收蛋白并纯化 ，与弗氏佐剂等量混合后 注射新西兰大白兔制备多克隆抗体，用 ELISA和 Westernblotting分别检测该抗体，结果显示：抗体效价可达 1：256000，且有特异性条带，表明pfPGRP-L的多克隆抗体制备成功。此外，Westernblotting检测黄颡鱼不同 组织pfeGRP-L蛋白的表达，发现在鳃、胸腺、肝脏、肾脏、头肾、脾脏、血液和肠道等不同组织 中都有 目的条 带，而在脾脏和肠道中表达更强。为pfPGRP—L的抗菌作用和功能研究奠定基础。 关键词：长型肽聚糖识别蛋白；原核表达 ；多克隆抗体；黄颡鱼 中图分类号：$965．199 文献标志码：A 文章编号：1000—2286(2016)04—0723—06 ProkaryoticExpressionandPolyclonalAntibodyPreparation of LongTypePeptidoglycan RecognitionProtein (pfPGRP-L)inYellowCatfish YANG Zhu—qing ，ZHONG Lie—peng ，LIU Yi，WANG Zi—rui， XIONG Liu—feng ，WEILi—li (1．CollegeofAnimalScienceandTechnology，JiangxiAgriculturalUniversity，Nanchang330045，Chi— na；2．CollegeofLifeScience，JiangxiNormalUniversity，Nanchang330022，China) Abstract：Inordertostudytheimportantrolesofpeptidoglycanrecognitionproteins(PGRPs)inthein— nateimmunity，primersweredesigned to amplify theconding segment，then，recombinantexpression vectors containingyellowcatfishPGRP—L(pfPGRP—L)wereconstructedandtransformedintoE．coliBL21(DE3)． TherecombinantfusionproteinwasinducedwithIPTG andisolatedbySDS．Th eisolatedfusionprotein wasusedtoproducethepolyclonalantibodyofpfPGaP—Lbyimmunizingrabbit．Then，theantibodywastested byELISA andwesternblotting，andtheresultsshowedthattheantib