6 蛋白质合成1219.pptVIP

蛋白质生物合成的条件： mRNA——模板 核糖体（rRNA）——场所 tRNA ——工具、原料 能量——ATP、GTP 酶及蛋白因子 mRNA 占细胞总RNA的2%-5%，大小差异较大； mRNA的5’端存在被翻译系统识别的结构。 原核mRNA 5’端 原核mRNA——多顺反子 SD序列：在起始密码子AUG上游的9~13个核苷酸处有一段可受核糖体结合、保护和富含嘌呤的共同序列，一般为AGGA，称SD序列。 作用：与核糖体小亚基16S rRNA 3’端结合，使mRNA与核糖体结合。（ mRNA与30S亚基结合，并正确定位）——翻译起始识别 真核mRNA的 5’端结构 5’CAPm7GpppN，3’poly（A）对翻译效率的调节有协同作用。 1. “第一AUG规律” ANNAUGGN 2. 5’端的二级结构对mRNA的翻译效率也有影响； 3. 先导序列的长度也会影响翻译起始效率和准确性。 遗传密码的性质 1.密码的连续性(commaless) 2.密码的简并性(degeneracy)由一种以上 密码子编码同一个氨基酸的现象 3.密码的普遍性(universality) 4. 密码的特殊性(specificity) 5. 密码子与反密码子的相互作用 tRNA功能 氨基酸活化形式的载体： 专一性识别氨基酸，形成氨基酰-tRNA 识别密码子 氨酰tRNA合成酶 识别AA的特异性： AA体积/构型/化学性质/与酶结合的能量 负载tRNA的校正功能： 结构上催化口袋/编辑口袋 核糖体 ——蛋白质生物合成的机器 原核生物核糖体的组成； RNA分子 +Proteins S-沉降速率 Svedberg 大小/构象 多核糖体 参与蛋白质合成的蛋白因子： 起始因子IF、延伸因子EF、终止因子RF 原核生物的蛋白因子： IF-1——G蛋白 IF-2—— 起始tRNA进入30S IF-3 ——双重功能 EF-Tu、Ts 真核生物的蛋白因子： CBP eIF-2、3、4A、4B等 原核生物蛋白质合成 合成起始 延伸 终止 大多数生物起始密码子是AUG—甲硫氨酸，但原核生物中Met-tRNAfMet必须先甲基化，生成甲酰甲硫氨酰-tRNA（ fMet-tRNAfMet ） 原核生物中除tRNAfMet外，其余tRNA是延伸tRNA 合成终止： 终止密码子——UAG、UAA、UGA 终止因子（释放因子）而非tRNA： RF-1 RF-2 抗生素 约40%的已知抗生素是翻译机器的抑制因子，在不同步骤，结合不同（单个）组分而抑制细菌蛋白合成，对真核生物无害。 研究蛋白合成机制的有用工具。 真核生物蛋白质合成 特点：1. 比原核需要更多的蛋白因子; 2. 40S亚基先与起始tRNA结合,再与 mRNA结合; 3. mRNA5’帽子结构和二级结构具有重 要作用. 扫描模型：40S亚基携带着Met-tRNAiMet 及相应起始因子进入mRNA5’端，沿mRNA滑动，寻找第一个AUG，与60S亚基结合，形成第一个肽键。 识别第一个AUG时，往往需要上下文正确（AGNNAUGG），才能使40S亚基与mRNA结合稳定，再与60S亚基形成完整的核糖体。 延伸： 终止： IRES内部核糖体进入位点 AUG下游起始翻译 IRES是RNA序列，功能类似于原核生物的RBS 真核生物中少见，多见于编码病毒mRNA; 真核表达载体 翻译调控 代谢性调控：起始因子和延伸因子的磷酸化/去磷酸化。 磷酸化促进蛋白质合成 CBPⅡ（Ser53） 促进40S起始复合物的结合处于磷酸化状态 抑制蛋白质合成 eIF-2、eEF-2 结构性调控：翻译效率受mRNA结构影响。 5’-帽子结构 易与eIF-4结合