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黄粉虫热休克蛋白基因的克隆与表达研究 陈 刚 王 锐 刘鉴稷 王 灵 团队成员: 答辩提纲 项目申请理由 项目创新性 项目实施方案 项目研究计划 项目申请理由 热休克蛋白（Hsps）是细胞或生物体遭受亚致死高温短暂协迫时，新合成的或含量增加的一类蛋白质。 HSPs在生物体内具有重要的生物学功能，如：充当分子伴侣，使生物获得耐热性和参与调控细胞骨架动力学等。 同时，HSPs的应用研究也早已引起人们的广泛关注，如：作为治疗肿瘤的新型疫苗和靶标分子，作为遗传育种、法医鉴定、监测环境污染等的生物标记，用于探索细胞器起源、研究物种进化等。 目前关于昆虫热休克蛋白的报道非常有限 ，黄粉虫热休克蛋白的研究更是未见报道。 项目申请理由 黄粉虫俗称面包虫，隶属鞘翅目、拟步行虫科、粉虫甲属，一生历经卵、幼虫、蛹、成虫4个生长发育阶段。 → ↓ ← ↑ 黄粉虫是我国传统的饲用和食用昆虫，长期以来广泛用作畜禽和其它一些特种经济动物的饲料（或饵料），现已广泛应用于农业、畜牧业、食品和医疗保健方面，具有极高的开发利用价值和广阔的市场前景。 畜牧养猪 食用做菜 食用油 畜牧养鸡 四川农业大学森林保护学实验室经过多年的努力，目前已选育出黑色型和黄色型2个黄粉虫新品系。 黄色型幼虫 黑色型幼虫 黑色型蛹 黄色型蛹 黑色型成虫 黄色型成虫 项目申请理由 前期研究表明，这2种色型黄粉虫在生长发育性状、繁殖能力、抗逆性、营养价值及主要逆境协迫相关同工酶等方面均存在较大差异。 但这2种色型黄粉虫的HSP基因及其表达规律是否也存在差异，它们表现出的抗逆性差异又是否与其HSP基因及其表达有关，至今均未见报道。 为给黄粉虫抗性育种及其饲养管理提供科学的理论依据，有必要对黄、黑2种色型黄粉虫的热休克蛋白基因及其表达规律进行研究。 项目创新性 1 首次对黄粉虫HSP基因的克隆进行研究 2 首次对黄粉虫不同发育阶段HSP基因的表达进行初步探索 3 首次对两种色型黄粉虫HSP基因及其表达的差异进行研究 项目实施方案 两种色型黄粉虫HSP基因克隆与序列分析 HSP扩增引物设计与合成 两种色型黄粉虫总RNA抽提 两种色型黄粉虫的HSP基因克隆 HSP基因序列分析 mRNA反转录合成第一链 cDNA扩增 目的片段回收与纯化 目的片段与载体的连接 转化感受态细胞 PCR筛选阳性克隆 1 两种色型黄粉虫HSP基因的克隆与序列分析 图一 2 两种色型黄粉虫的HSP基因表达研究 两种色型黄粉虫热休克蛋白基因表达规律研究 卵期热休克蛋白基因表达规律研究 幼虫期热休克蛋白基因表达规律研究 蛹期热休克蛋白基因表达规律研究 成虫期热休克蛋白基因表达规律研究 试虫热处理 总RNA提取 mRNA反转录合成第一链 引物设计 模板定量 RT-PCR 图二 项目研究计划 2010年10月—2011年10月：完成2种色型黄粉虫的饲养及其热休克蛋白基因克隆。 2011年10月—2012年4月：完成2种色型黄粉虫热休克蛋白基因表达规律的研究；同时进行试验数据的分析处理，并撰写学术论文（1-2篇）和总结报告。