专题6 遗传的分子基础(含基因诊断、基因治疗等).pptVIP

目前临床疾病的诊断方法 临床诊断 血清免疫学诊断 生化学诊断 基因诊断 从基因水平提供更早期、更加准确的诊断依据 基因诊断的应用 感染性疾病的病原诊断 结核病、柯萨奇B3病毒感染的心肌炎、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV），爱滋病等 各种肿瘤的生物学特性的判断 遗传病的基因异常分析（包括产前诊断） 器官移植组织配型 法医学中个体识别、亲子鉴定 基因诊断的原理 核酸分子杂交是基因诊断的最基本的方法之一。 它的基本原理是：互补的DNA单链能够在一定条件下结合成双链，即能够进行杂交。 这种结合是特异的，即严格按照碱基互补的原则进行，它不仅能在DNA和DNA之间进行，也能在DNA和RNA之间进行。 当用一段已知基因的核酸序列作出探针，与变性后的单链基因组DNA接触时，如果两者的碱基完全配对，它们即互补地结合成双链，从而表明被测基因组DNA中含有已知的基因序列。 进行基因检测有2个必要条件：一是必需的特异的DNA探针 二是必需的基因组DNA 当两者都变性呈单链状态时，就能进行分子杂交。 一是必需的特异的DNA探针 探针的来源有3种： （1）来自基因组中有关的基因本身，称为基因组探针（genomic probe）； （2）从相应的基因转录获得了mRNA，再通过逆转录得到的探针，称为cDNa 探针（cDNa probe）。 （3）还可在体外人工合成碱基数不多的与基因序列互补的DNA片段，称为寡核苷酸探针。 探针的标记： 为了确定探针是否与相应的基因组DNA杂交，有必要对探针加以标记，以便在结合部位获得可识别的信号,通常采用放射性同位素32P标记探针的某种核苷酸α磷酸基。 二是必需的基因组DNA PCR技术（1988） DNA聚合酶链式反应 基因芯片 通过微技术手段将大量特定序列的DNA片段（探针）有序地固定在尼龙膜、玻片或硅片上，从而能大量，快速、平行地对DNA分子的碱基序列进行测定和定量分析。 基因芯片 * 复习要点 ◆ 肺炎双球菌转化实验的原理和过程 ◆ 噬菌体侵染细菌实验的原理和过程 ◆ 生物的遗传物质 证明DNA是遗传物 质的两个经典实验 肺炎双球菌的转化实验 噬菌体侵染细菌 一、肺炎双球菌的转化实验 1. 实验材料： S型肺炎双球菌 R型肺炎双球菌 小鼠 有多糖类荚膜 无多糖类荚膜 菌落光滑 菌落粗糙 使人患肺炎或使小鼠患败血症死亡 无毒性 （一） 格里弗斯转化实验 2. 实验过程： 结论：已经被加热杀死的S型细菌中，必然含有某种促成这一转化的活性物质——转化因子 3. 实验结论： R型菌 S型菌 转化 S型菌 后代 作出假设：这种转化因子就是遗传物质 ？ （二） 艾弗里转化实验 1. 实验材料： S型菌、R型菌 2. 设计思路： 设法把DNA与蛋白质、多糖等物质分开，单独地直接去观察它们的作用 3. 实验过程： 多糖 脂类 蛋白质 RNA DNA DNA水解物 S型活细菌 分别与R型活细菌混合培养 R型 R型 R型 R型 R型 S型 R型 R型 S型 3. 实验过程： （二） 艾弗里转化实验 1. 实验材料： S型菌、R型菌 2. 设计思路： 设法把DNA与蛋白质、多糖等物质分开，单独地直接去观察它们的作用 3. 实验过程： 4. 实验结论： DNA是遗传物质 蛋白质不是遗传物质 二、噬菌体侵染细菌的转化实验 T2噬菌体 1. 实验材料： 大肠杆菌 2. 设计思路： 设法把DNA与蛋白质分开，单独地直接去观察它们的作用。 32P 35S 方法：同位素标记法 标记 DNA 蛋白质 标记 3. 实验过程： ①用放射性同位素35S标记噬菌体外壳蛋白质 细菌内无放射性 子代噬菌体 ②用放射性同位素32P标记内部DNA 细菌内有放射性 子代噬菌体 第 一 组 第 二 组 亲代 噬菌体 35 S标记 蛋白质 32 P标记DNA 寄主 细胞内 无35S标记蛋白质 有32P标记DNA 子代 噬菌体 外壳蛋白质无35S DNA有32P 标记 实验 结论 DNA分子具有连续性，是遗传物质 4. 实验结论： 三、生物的遗传物质 核酸是一切生物的遗传物质，核酸包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），绝大多数生物都是以DNA作为遗传物质的，因此DNA是主要的遗传物质。 复习要点 ◆