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广州菲罗门科学仪器有限公司 Guangzhou FLM Scientific Instrument Co.,Ltd HPLC 应用条件与维护技术 魏 少 勇 paul@ 广州菲罗门科学仪器有限公司 Guangzhou FLM Scientific Instrument Co.,Ltd 目录 1、液相色谱柱注意要点 2、如何延长色谱柱寿命 3、如何保护色谱柱 液相色谱柱注意要点 新柱子的接收 确认色谱柱 是您订购的吗？ 规格是否正确？ 相正确与否？ 在标准条件下使用标准品测试色谱柱的性能 Phenomenex 每一根色谱柱都是经过单独测试的  管路和接头 色谱性能取决于整个系统而不仅仅是色谱柱本身 管路和接头会影响系统的死体积 系统死体积会导致： 峰展宽 峰变形 柱效降低 灵敏度下降 管路 选择管路类型和内径 泵到进样器 较大内径管路（0.010“)比较合适 进样器到色谱柱 最小化管路内径 典型使用的是（0.007“) 和（0.005“)内径 色谱柱到检测器 最小化管路内径 较大内径会减小已获得的分离度 典型使用的是（0.007“) 和（0.005“)内径 检测器到废液口 较大内径比较合适（=0.010“) 接头 不是所有色谱柱的端尾接头都是一样的 使用不同种类/形状的卡套 不同长度的活塞（0.080“）或（0.130“) 活塞长度非常重要 管路必须与色谱柱的塞板齐平 如果管路与色谱柱的塞板不能齐平会导致死体积的增加或流动相的泄漏 手紧接头 液相色谱柱注意要点 液相色谱柱注意要点 流动相 使用新的色谱柱时,至少需用10-30柱体积 HPLC级试剂 使用所有的流动相前必须先过滤并脱气 确认流动相中缓冲盐的溶解性 确认样品在流动相中的溶解性 液相色谱柱注意要点 其它注意事项 pH值保持在2-8之间(A型硅胶)或1.5-10.0之间(B型硅胶) 低pH值会水解你的固定相 高pH值会溶解硅胶 背压必须保持在3500psi 以下 避免压力的突变 液相色谱柱注意要点 保养与保存 切忌用缓冲盐保存色谱柱 用5倍柱体积不含缓冲溶液的流动相来冲洗，除去缓冲盐 反相柱储存液：65/35 有机溶液/水 正相柱储存液：异丙醇或正已烷 离子交换储存液：甲醇 SEC 或Diol储存液: 0.05%NaN3水溶液或10%甲醇 如何延长色谱柱寿命 使用合适的流动相 注射样品前的处理 经常监测背压 典型背压（在65/35的乙腈/水) 150*4.6mm 3um硅胶典型背压:980psi 150*4.6mm 5um硅胶典型背压:710psi 250*4.6mm 5um硅胶典型背压:1180psi 使用合适的溶剂保存色谱柱 如何延长色谱柱寿命 及时清洗色谱柱(使用Phenomenex色谱柱时，我们建议反冲) 反相柱 用下列10倍柱体积的溶剂清洗: 95%水/5%ACN THF(可省略) 95% ACN/5%水 流动相 正相柱 用下列10倍柱体积的溶剂清洗: 正已烷 二氯甲烷 异丙醇 二氯甲烷 流动相 其它类型色谱柱的冲流方法请联系广州FLM公司 如何保护色谱柱 保护色谱柱的原因 延长色谱柱的寿命 减少系统损失 长期来看，可以节省时间和费用 得到最优化的结果 如何保护色谱柱 流动相进口端使用过滤网 在线过滤 使用保护柱 对流动相进行脱气 对所有样品进行过滤处理 如何保护色谱柱 保护柱 优点： 去除强保留杂质 延长色谱柱寿命 保持高柱效 降低分析成本 如何保护色谱柱 SecurityGuard 通用的保护柱芯系统 直接与色谱柱相连，减少死体积 100%稳定，生物兼容性流径，对金属敏感样品适用 专利设计 使用简单 价格适中 固定相选择多样化 如何保护色谱柱 如何保护色谱柱 总结 保护色谱柱 延长色谱柱寿命 确保色谱柱最优化的性能 确保得到理想的分析结果 提高工作效率 节省成本 保护HPLC系统 减少系统维修次数 确保理想的分析结果 节省成本 * * 液相色谱柱注意要点 液相色谱柱注意要点 液相色谱柱注意要点 *