分子生物学(实验报告封面).docVIP

分子生物学综合性实验 脂肪酶基因克隆 表达 纯化（上） 班 级 姓 名： 学 号： 组 号： 小组成员： 指导老师： 华 东 理 工 大 学 应用生物学系 目 录 摘要 1 实验原理 4 目的基因 载体质粒 表达宿主 1.1外源基因的制备和载体质粒的制备 1.1.1 PCR 1.1.2 PCR产物纯化 1.1.3 质粒抽提 1.2外源片段与载体片段的酶切和回收 1.2.1 DNA酶切 1.2.2 DNA回收 1.2.3 DNA连接 1.3感受态细胞的制备与转化 1.3.1 感受态细胞制备 1.3.2 感受态细胞转化 1.4重组子的鉴定 1.4.1 菌落PCR 1.4.2 质粒快抽 1.4.3 酶切鉴定 1.5重组菌表达 1.5.1 RNA抽提 1.5.2 RT 1.6重组菌的转录和蛋白质表达分析 1.6.1 SDS电泳 2 材料与方法 10 2.1外源基因的制备和载体质粒的制备 10 2.1.1 PCR 2.1.2 琼脂糖凝胶电泳 2.1.3抽取质粒 2.2外源片段与载体片段的酶切和回收 12 2.2.1 预酶切 2.2.2 大量酶切 2.2.3 酶切产物电泳及切胶回收