项目四 灭活剂、保护剂与免疫佐剂.ppt

项目三 灭活剂、冻干保护剂与免疫佐剂 任务1 灭活剂 任务2 冻干保护剂 任务3 免疫佐剂 任务1 灭活剂 一、灭活与灭活剂 1、灭活概念： （1）是指破坏微生物的生物学活性、繁殖能力和致病作用，或破坏外毒素的毒性作用，但尽可能不影响其免疫原性，用于生产灭活疫苗或类毒素； (2)指破坏诊断血清或被检血清中的补体活性，以避免补体对诊断试验的干扰作用。 2、灭活方法 物理方法（基本不用） 化学方法（常用） 3、灭活剂：用于灭活微生物的化学试剂或药物。 二、常用灭活剂的应用 ⒈甲醛溶液：最常用 2.苯酚（石炭酸）：用于防腐，很少用于疫苗研制。 3.结晶紫：蛋白质变性。（溶于有机溶剂）用于诊断抗原的制备：鸡白痢抗原 4.β-丙内酯 狂犬病灭活苗制备所用 5 烷化剂 乙酰基乙烯亚胺 二乙烯亚胺 缩水甘油醛 6 硫柳汞 用于生物制品的防腐和消毒。 7 缩水甘油醛 注意：灭活剂对人有害，有时对皮肤黏膜有强烈刺激性。 三、影响灭活作用的因素 ⒈灭活剂特异性：石炭酸对真菌和病毒效果差，甲醛最常用。 ⒉微生物的种类和特性：一般含氮量越高，甲醛等灭活剂的消耗量就越大，灭活脱毒速度越慢。 ⒊灭活剂浓度（一定要合适） ⒋灭活温度（具体不同病原体和或毒素，其灭活时间和温度不一致）。 ⒌灭活时间：随灭活剂浓度及温度升高，灭活时间则缩短。 ⒍PH：微酸时灭活速度慢，抗原性保持较好。 ⒎有机物的存在：被灭活的病毒或细菌液中，如果含有血清或其它有机物质，会影响灭活剂的灭活能力。 任务2 冻干保护剂 一、冻干保护剂概念： 保护剂：又称稳定剂，是指在冻干过程中及冻干后使生物制品的生物活性物质免受破坏的一类物质。 保护剂用途 ①菌种或毒种保存：常用甘油作保护剂。 ②细胞株保存：常用二甲基亚砜（DMSO）。 ③疫苗冷冻真空干燥制备时：加脱脂乳（或二甲基亚砜）和蔗糖等（不同国家有不同配方）。 ④干扰素类生物活性物质的保存：加葡聚糖。 二、冻干保护剂的组成 ⒈低分子物质（营养液）： 营养液：脱脂乳、蛋白胨、氨基酸、和糖类等 ⒉赋形剂(高分子物质）骨架 赋形剂：蔗糖、山梨醇、乳糖、PVP、葡聚糖等 ⒊抗氧化剂 抗氧化剂：Vit.C、Vit.E和硫代硫酸钠等 三、常用的冻干保护剂（稳定剂） 复合物 糖类 盐类 醇类 酸类 聚合物 几种兽医生物制品常用的保护剂配制： ⒈ 5%蔗糖（乳糖）脱脂乳保护剂 ⒉ 脱脂乳-谷氨酸钠保护剂 ⒊ 7.5%葡萄糖血清保护剂 ⒋ 环乙醇-血清保护剂 不同微生物适用的保护剂 四、影响冻干保护剂效能的因素 每种微生物或生物制品均有其最佳冻干保护剂的组合。 ⒈保护剂种类：根据微生物种类或者用途来添加不同种类保护剂。 ⒉保护剂组分浓度：严格按照配方执行。 ⒊保护剂配制方法：如糖类均采用114°C 30min灭菌 ⒋保护剂酸碱度（PH）：应于微生物生存时的PH相同或相近。 任务3 免疫佐剂 一、免疫佐剂（佐剂）概念： 单独使用没有免疫原性，与抗原物质合并使用能非特异性地改变或增强机体对该抗原的特异性免疫应答，发挥其辅佐作用的物质。 二、常规免疫佐剂 （一）铝不溶性盐类佐剂 ⒈氢氧化铝胶（铝胶） 可用于制造多种兽用疫苗。 ⒉明矾 有钾明矾 和铵明矾 ⒊磷酸三钙：在疫苗中加入氯化钙和磷酸氢二钠，使在疫苗中化合成磷酸三钙。 （二）弗氏佐剂 （三）油乳佐剂 “乳剂“是将一种溶液或干粉分散成细小的微粒，混悬于另一不相溶的液体中所成的分散体系。 当以水为分散相，以加有乳化剂的油为连续相时，制成的乳剂为油包水型乳剂（水／油或W／O），是生物制品采用的主要剂型。 白油佐剂 一种好的乳剂苗，应该是W／O或O／W型，粘度较低，颗粒大小均匀，稳定性良好，呈乳白色。 （四） 蜂胶佐剂 （五）微生物佐剂 三、新型免疫佐剂 1、细胞因子类 2、免疫刺激复合物 * *