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® TRIZOL Reagent Cat. No. 15596-026 Size: 100 ml Store at 2 to 8°C. 警告：在与皮肤接触及吞咽有毒。可导致烧伤。与皮肤接触后，应立即用洗涤 剂和大量水冲洗。如感到身体不适，应就医（如需要，应出示本产品标签）。 本产品含有苯酚（108-95-2 ）和其他成分（NJTSRN5000P ）。 已经证明TRIZOL 在室温下可稳定保存 12 个月。不过，我们建议在储存于2-8°C，以保证 最佳性能。 描述： TRIzol 试剂（美国专利号，5346994 ）是即用型细胞和组织总RNA 提取试剂。该试剂 是一步法苯酚和异硫氰酸胍解决方案，是对Chomczynski 和Sacchi 开发的单步RNA 提取法 （1）的改善。在匀质化或溶解样品中，TRIzol 试剂可保持RNA 的完整性，同时能破坏细 胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分离成水相和有机相。 RNA 存在于水相。水 相转移后，RNA 通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，样品中DNA 和蛋白质可通过相继沉淀 回收（2 ）。用乙醇沉淀可从中间相得到DNA ，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质（2 ）。 与DNA 的共纯化可能对不同样品得到的RNA 的归一化有用。 此技术可完美应用于少量人类、动物、植物或细菌来源的组织（50-100 毫克）和细胞 6 7 （5×10 ），以及大量的组织（≥1 g ）和细胞（10 ）。该TRIzol 试剂方法简单，允许大量 样本同时处理。整个过程可在一小时内完成。用TRIZOL 提取总RNA 可避免蛋白质和DNA 污染。可用于Northern blot 分析、斑点杂交、poly （A ）+选择、体外翻译、RNA 酶保护分 析和分子克隆。聚合酶链反应（PCR 反应）中，当两条引物位于单个外显子时，推荐使用 扩增级DNA 酶I(Cat. No. 18068)处理分离出的RNA 。 TRIzol 试剂方便提取不同种类、不同分子大小的RNA 。例如，从大鼠肝中提取RNA ， 经琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色，高分子量RNA 离散带其长度可高达7 kb 和15 kb ，(组 成mRNA’s 和hnRNA’s) ，两个主要的核糖体RNA 带在~5 kB （28 S ）和~2 Kb （18 S）。低分 子量RNA 介于0.1 和0.3 kB 之间 （tRNA ，5S）。分离出的RNA 用TE 稀释，其A260/A280 比值≥1.8 。 防止RNA 酶污染的注意事项 通过不当的技术操作，RNA 酶可在任何提取程序中意外引入RNA 的制备中。由于酶的 活性难以抑制，所以必须防止其引入。进行RNA 工作时，下列准则应予以遵守。 • 总是戴着手套。皮肤上通常包含的细菌和霉菌，可污染RNA 的制备，同时也是RNA 酶的一个来源。良好的微生物操作技术可防止微生物污染。 • 使用无菌制品，专为RNA 工作准备的一次性塑料器皿和自动吸管可以避免与共用设 备的RNA 酶交叉污染。例如，一个实验室正在使用的RNA 探针可能用得上RNA 酶A 或 RNA 酶T1 以减少过滤背景，其中任何非一次性物品（如自动吸管）可能是大量RNA 酶的 来源。 • TRIzol 试剂的存在，可保护RNA 酶对RNA 的污染。下游样品处理要求非一次性的 玻璃器皿或塑料器皿无RNA 酶。玻璃物品可以在 150 °C 烘烤4 小时，塑料制品，可浸泡 10 分钟的0.5 M NaOH 溶液，然后用清水彻底冲洗，并高压蒸汽灭菌。 其他需要注意的事项： • 用小于2 毫升体积的TRIZOL 试剂工作时，建议使用一次性透明聚丙烯管。 • 对于较大的体积，用玻璃（Corex ）或聚丙烯管，并测试以确保该管装满 TRIzol 试剂和 氯仿时可承受12,000×g 的离心力，不要使用泄漏或有裂纹的管子。 • 离心前小心平衡管子的重量 • 玻璃管必须用封口膜密封，密封时封口膜要覆盖有螺丝处，聚丙烯管离心前必须盖好。 RNA 提取的指导： 警告：当使用TRIzol 试剂工作时，应