紫外线胁迫麦长管蚜DNA差异片段的克隆及序列功能分析.pdfVIP

— １０２— 江苏农业科学　２０１７年第４５卷第５期 赵永田，赵惠燕．紫外线胁迫麦长管蚜ＤＮＡ差异片段的克隆及序列功能分析［Ｊ］．江苏农业科学，２０１７，４５（５）：１０２－１０４　． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１７．０５．０２８ 紫外线胁迫麦长管蚜 ＤＮＡ差异片段 的克隆及序列功能分析 １，２ ２ 赵永田 ，赵惠燕 （１．四川广播电视大学农林卫生学院，四川成都６１００７３；２．西北农林科技大学植物保护学院，陕西杨凌７１２１００） 　　摘要：应用扩增片段长度多态性（ａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，简称ＡＦＬＰ）技术对紫外线诱导的麦长管 蚜基因组变异进行筛选，对获得的６３个差异片段进行回收克隆测序。经Ｂｌａｓｔ分析，发现１９条同源性高的基因，按照 基因功能可将差异序列划分为５类：防御基因、调节能量和信号基因、蛋白质合成基因、损害基因、未知功能基因。蚜 虫对紫外线的响应机制涉及多种代谢过程的基因，如与能量代谢和信号传导、细胞凋亡等有关的基因，还涉及具有保 守结构域的调控因子等。 　　关键词：紫外线；麦长管蚜；ＤＮＡ片段；克隆；序列分析 ＋ 　　中图分类号：Ｓ４３５．１２２．２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１７）０５－０１０２－０３ ［８］ 　　蚜虫是小麦上的主要害虫，其中麦长管蚜［Ｓｉｔｏｂｉｏｎａｖｅ 现，９条可能导致 ＢＰＤＥ引发肺癌有关的基因片段 。然而 ｎａｅ（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）］作为麦蚜的优势种群，可通过传播病毒、刺 利用ＡＦＬＰ对紫外线诱导麦长管蚜的遗传变异分析尚未见报 吸汁液、分泌蜜露等方式为害，严重影响小麦的产量和品质。 道。本研究选择麦长管蚜为试验材料，利用ＡＦＬＰ技术分析 ［１－２］ 蚜虫作为ｒ对策者，环境是导致种群分化的主要因素 。 经紫外线处理和对照组之间的ＤＮＡ变异，对差异基因进行筛 近年来，臭氧层空洞导致紫外线辐射剂量增加，特别是ＵＶ－ 选、克隆、测序，分析差异基因的功能，初步探索蚜虫对紫外线 ［３］ Ｂ波段 ，不可避免地对蚜虫的遗传与进化产生巨大的选择 的响应机制，为蚜虫进化研究提供理论依据。 压力。姚建秀等运用随机扩增多态性 ＤＮＡ标记（ｒａｎｄｏｍａｍ １　材料与方法 ｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ，简称ＲＡＰＤ）技术对麦长管蚜辐射诱 导一代的ＤＮＡ多态性进行分析表明，辐射条件下的遗传距离 １．１　试虫 ［４］ 增大，紫外线可诱导产生种下分化 。都二霞等通过设置不 试验虫源由德国联邦农林生物研究中心提供。处理方 同时间和强度的紫外线照射桃蚜，运用 ＳＳＲ（ｓｉｍｐｌｅｓｅｑｕｅｎｃｅ 法：取发育一致的成虫，分成对照组和试验组。试验组经紫外 ｒｅｐｅａｔｓ）技术研究发现，Ｆ代桃蚜产生可遗传变异致使Ｆ代 线照射时间为１、２、３、４、６、８ｈ；对照组采用正常光照。光源高 １ ２ 的ＤＮＡ也发生变异，且各处理平均多态位点率之间差异显 度统一为蚜虫上方３０ｃｍ处。处理后的当代成蚜标记为 Ｆ ０ ［５］ 著 。赵惠燕等对桃蚜设置不同时间的紫外线诱导，采用