紫外-可见分光光度计的测量应用.pdf

实验3 紫外－可见分光光度计的测量应用 一、实验目的 1 ．了解紫外－可见分光光度计的结构、工作原理及应用。 2 ．了解关于物质的吸收光谱的基本定律。 3 ．初步学会应用紫外－可见分光光度计测量物质 （各种透 明晶体和溶液）的吸收光谱或透过谱 （如光子晶体的透 过谱）。 4 ．了解应用紫外－可见分光光度计测量溶液浓度的方法。 二、光的吸收定律与物质的光谱 紫外光是波长范围在 200 400nrn 的电磁波，可见光是 波长在 400 750nrn 范围电磁波。当光穿过媒介传播时， 媒介中的物质分子和原子就会与光波产生相互作用，使光 的能量发生损耗，这就是所谓的光的吸收现象。不同的物 质可能与不同波长的光波发生较强的相互作用，这就出现 所谓的选择性吸收现象。例如，红色玻璃对红光的吸收比 较小，而对其它波长的光波的吸收较强，从而使得该玻璃 看起来是红色的。 如果固定输入光的强度，从 200nrn 到 750nrn 连续改 变入射光的频率，将每个波长的光穿过某 物质后的输出 光强记录下来，则以入射光频率为横坐标、以出射光强度 28 为纵坐标而画出的曲线称为该物质的紫外－可见吸收光 谱。 朗伯 （Lambert ）发现，光在媒质中的光强随其在媒质 中的传播距离而发生指数衰减：即 I＝I0 exp （－kx ） (1) 其中 I0 为入射处的光强，I 为出射处的光强，X 为光在媒 质中的传播距离，k 为衰减系数。这就是媒质中的光的吸收 的基本定律，通常称这个规律为朗伯定律。 当吸收物质为某种物质的溶液时，设溶剂是不吸收 光的，则该溶液对光的吸收率应与光波通过的路程上单位 长度内吸收光的分子数，也就是与浓度 C 成正比，即 k= αC (2) 引入透过率 T= I/ I0 ，吸光度 A= — logT ，令 α= α/2.303，则由式 （1）有： A= α C x （3 ） 通常称公式 （3）叫比尔定律。由此可知，先配出标准 浓度 （C 。）的所研究物质的溶液，测出其吸光度 （A 。）， 则任意浓度的所研究物质的溶液的浓度值可以通过测量其 吸光度而求出。由式 （3 ）有：A 。＝αC 。x ； A= αC x ; 从 而有 A 。／A ＝C 。／C，即有 C ＝ C 。A ／A 。 （4 ） 29 三、紫外－可见分光光度计UV－ll00 简介 紫外 可见分光光度计是物质的吸收光谱测量的必 仪器。它 的种类繁多，有多通道和单通道、手动和自动等多种形式。但任何 一种分光光度计均包含有光源、色散系统、吸收池和光电检测系统 等基本组成部分。UV －1100 等较先进的系统还配有数据记录、处 理和显示部件。 UV －1100 所采用的光源由钨丝灯和氘灯构成。钨丝灯用于提 供可见光，氘灯用于提供紫外光。UV －1100 采用光栅来实现分色 作用。UV －1100 的光电检测系统由光电倍增管、信号电压放大器 和计算机构成。计算机同时担任数据处理和显示的功能。图（1） 和图（2 ）分别示出了 UV －1100 整个系统的组成框图和光路图。 UV －1100 的工作波长范围为200nrn －800 nrn ．系统具有自 检功能，可以按波长扫描方式、定波长方式、动力学实时取样方式 进行测量，具有定量分析测量功能和谱图处理功能。 四、实验内容 1．基本操作方法的掌握 开机操作步骤：（1）打开分光光度计电源，钨丝灯