第6章 Annexin V-FITC+PI.docVIP

实验日期：2015-08-03~06 实验人员：张科 、王茂田、周婉垚、邱世稥、杜莹莹、郭慧杰、莫春芬 实验名称：通过Annexin Ⅴ-FITC+PI试剂盒检测浓度为c的化合物A作用于LO2、HepG2、MCF-7、MCF-10a 48hr后的凋亡情况 实验目的： 检测出浓度为c的化合物A是否促进LO2、HepG2、MCF-7、MCF-10a的凋亡 计算出浓度为c的化合物A在48hr后对细胞的凋亡率 实验原理： 1.磷脂酰丝酸（P.S）正常情况下位于细胞膜内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜表面，暴露在细胞外环境中，Annexin Ⅴ能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin Ⅴ进行FITC（荧光素）标记。用以标记的Annexin Ⅴ作为荧光探针用流式细胞仪检测凋亡的发生。 2.碘化丙啶（PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期和坏死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin Ⅴ与PI配合使用，就可以将凋亡早期、中晚期及死细胞区分开。 实验设计 实验参数 备注 1 细胞培养条件 24孔板，37℃，5%CO2 2 细胞 LO2、HepG2、Mcf-10a、Mcf-7 3 刺激方式 小分子化合物SIS-13/25/27 母液浓度40mM，作用浓度20μM和40μM。 4 铺板后培养时间 24hr 5