基因工程一轮校.ppt

某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活（Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因）。有人将此质粒载体用BamHI酶切后，与用BamHI酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题： （2）在上述筛选的基础上，若要 筛选含有插入了目的基因的重组 质粒的大肠杆菌的单菌落，还需 使用含有_______的固体培养基。 （3）基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自于_____________ （2）四环素 （3）受体细胞 基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 (一)、目的基因主要是______________________ 编码蛋白质的基因 （二）、获取目的基因的常用方法有哪些? 1、从基因文库中获取 2、利用PCR技术扩增 3、人工合成 1、从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库. 基因文库 基因组文库 部分基因文库 （如:cDNA文库） （1）.基因文库: ⑵基因文库的构建方法: ①直接分离法： 基因组DNA文库的构建 cDNA文库的构建 ②反转录法： ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ③条件：___________、_______________、___________ 、 ___________ . ②原理：__________ 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA双链复制 模板DNA 四种脱氧核苷酸 引物 热稳定DNA聚合酶 2.利用PCR扩增目的基因 前提：要有一段已知目的基因的核苷酸序列，根据这一序列来合成引物 靶序列 靶序列 PCR 循环第一步DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成___________ 氢键 单链DNA 靶序列 靶序列 引物 Ⅰ 引物 Ⅱ 5’ 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’ PCR 循环第二步退火（复性55℃-60℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。 双链 靶序列 靶序列 引物Ⅰ 引物Ⅱ 5’ 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’ Taq DNA 聚合酶 PCR 循环第三步延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的________。 DNA链 靶序列 靶序列 第1个PCR循环完成后 ：得到两个靶序列 3.人工合成： ——根据已知的核苷酸序列合成DNA 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 质粒 含目的基因的DNA片段 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 表达载体 同一种 1.过程 二、基因表达载体的构建——核心 限制酶切割位点的选择必须保证目的基因，标记基因的完整性，以便于检测和表达。 a、使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代 b、同时使目的基因能表达和发挥作用 思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？ 2、基因表达载体的作用 3.基因表达载体的组成： 它们有什么作用？ a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 位于基因的首端,是RNA聚合酶识别和结合位点 位于基因的末端,终止转录 鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来 1、将目的基因导入植物细胞 ①农杆菌转化法 ②基因枪法 ③花粉管通道法 三、将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法 特点: 能感染双子叶植物和祼子植物（产生酚类化合物）,对多数单子叶植物无感染能力 Ti质粒的T—DNA可转移至受体细胞并整合到其染色体上 转化过程: Ti质粒 目的基因 构建 表达载体 导入 植物细胞 插入 植物细胞染色DNA 表达 新性状 转入 农杆菌 2、将目的基因导入动物细胞 方法: 显微注射技术 操作程序: 提纯含目的基因表达载体 取受精卵 显微注射 移植到子宫 受精卵发育 新性状动物 （12课标）根据基因工程的有关知识，回答下列问题： ①限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有 和