双价抗虫基因植物表达载体的构建及其在烟草中的表达.pdfVIP

王志斌等: 双价抗虫基因植物表达载体的构建及其在烟草中的表达 双价抗虫基因植物表达载体的构建及其在烟草中的表达① 王志斌② 　郭三堆 ( 中国农科院生物技术研究中心生化与分子生物学室　北京 100081) 摘　要　利用人工合成及密码子优化后的雪花莲凝集素 (GNA ) 基因, 与人工合成的 GFM cry IA 构建了双价基因中间载体。双价基因进一步亚克隆到植物表达载体pB I1211 上, 获得了带有两个抗虫基因 及 基因的高效植物表达载体 4 , 在载 cry IA GNA pGW BA I 体中两基因的 5 ′端、3 ′端各加入与在植物中能增强基因转录和翻译有关的调控元件。通过 根癌农杆菌介导叶盘法转化烟草 326, 获得 28 株卡那霉素抗性植株, 随机抽取 17 株经 K PCR 及进一步 Sou thern 印迹检测, 证实了双价抗虫基因在烟草基因组中的整合。转基因 烟草杀棉铃虫试验表明 40% 的转基因烟草植株对棉铃虫具有高抗性; 抑制蚜虫试验表明 有效降低了蚜虫繁殖率, 转基因植株抑制蚜口密度为 30%～ 85% 不等, 并且获得了数株 兼抗棉铃虫及蚜虫效果均良好的转基因烟草植株。 关键词　cry IA , 雪花莲凝集素, 抗虫性, 转基因植株, 棉铃虫, 蚜虫 0　引言 　　全球每年用化学杀虫剂防治害虫的费用高达 100 亿美元, 即使如此, 每年虫害导致的损失仍 占农作物总产量的20%～ 30% [ 8 ]。因此, 有效防治害虫已成为有关国民经济健康发展的大事。利 用转基因技术使植物表达抗虫基因防治害虫则是综合防治害虫的重要途径之一。 危害农作物的主要害虫多属于鳞翅目害虫和同翅目害虫。棉铃虫、红铃虫、螟虫等都是能给 农业带来毁灭性损失的鳞翅目害虫; 而蚜虫、稻飞虱等同翅目害虫则是另一类重要的世界性害虫, 其广泛危害农作物和园艺作物, 除取食引起的直接损失外, 还传播近 100 种植物病毒, 从而造成 [ 1 ] 作物的更大损失 。以 1994 年中国农业年鉴记载为例, 1993 年我国小麦蚜虫中等发生年, 损失小 麦 7 亿公斤, 占小麦虫害损失的48 2% ; 棉蚜中等发生年, 损失棉花 3000 万公斤; 而稻飞虱则导 致损失水稻 5 亿公斤。 转苏云金芽孢杆菌 cry 基因抗鳞翅目及鞘翅目害虫的转基因研究已经取得了很大的进 展[ 24, 12, 17, 19, 23, 24 ] , 在我国, 具有自主知识产权的转cry IA 基因抗虫棉已可实行商品化生产, 并已有 投资近亿元成立的“创世纪转基因有限责任公司”, 这些必将对我国的棉花生产起到巨大促进作用。 [ 1 ] ( 目前, 利用植物凝集素防治蚜虫等同翅目害虫也已做了许多研究工作 。雪花莲凝集素 Ga lan thus n iva lis aggu lu tin in , GNA ) 在已知凝集素中的抗虫效果最好, 且对人畜几乎无害, 因而得到了更 多的研究。GNA 对刺吸式口器害虫如蚜虫、褐飞虱、叶蝉等具有较好的抑制效果, 并且对鳞翅目 害虫也具有中等抗性[ 5, 9, 11, 1416, 18 ]。 与 具有不同的作用机理[ 2, 7, 10 ] , 将 与 基 cry IA GNA cr