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毕赤酵母表达的培养基配制［5］ 2.1 LB（Luria－Bertani）培养基： Trypton l％ Yeast Extract 0.5％ NaCl l％ PH 7.0 制作平板时加入 2％琼脂粉。121高压灭菌 20min。可于室温保存。用于培养pPICZαA原核宿主菌TOP10F’时可加入Zeocin 25ug / ml。 2.2 LLB（Low Salt LB）培养基： Trypton l％ Yeast Extract 0.5％ NaCl 0.5％ PH 7.0 制作平板时加入 2％琼脂粉。121高压灭菌 20min。可于室温保存数月。用于培养pPICZαA原核宿主菌TOP10F’时，加入Zeocin 25ug / ml，可以4条件下保存1～2周。 2.3 YPD （又称YEPD） Yeast Extract Peptone Dextrose Medium，（Yeast Extract Peptone Dextrose Medium，酵母浸出粉/胰蛋白胨/右旋葡萄糖培养基） Trypton 2% dextrose (glucose) 2% +agar 2% +Zeocin 100 μg/ml 液体YPD培养基可常温保存；琼脂YPD平板在4可保存几个月。加入Zeocin 100ug / ml，成为YPDZ培养基，可以4条件下保存1～2周。 2.4 YPDS + Zeocin 培养基（Yeast Extract Peptone Dextrose Medium）： yeast extract 1% peptone 2% dextrose (glucose) 2% sorbitol （山梨醇）1 M +agar 2% + Zeocin 100 μg/ml 不管是液体 YPDS培养基，还是YPDS + Zeocin 培养基，都必须存放4条件下，有效期1～2周。 2.5 MGY Minimal Glycerol Medium （最小甘油培养基） （34%YNB；1%甘油；4*10-5%生物素）。将800ml灭菌水、100ml的 10*YNB母液、2ml的500*B母液和100ml的10*GY母液混匀即可，4保存，保存期为2个月。 2.6 MGYH Minimal Glycerol Medium + Histidine （最小甘油培养基 + 0.004%组氨酸） 在1000ml的MGY培养基中加入 10ml的100*H母液混匀，4保存，保存期为2个月。 2.7 RD Regeneration Dextrose Medium （葡萄糖再生培养基） （含有：1mol/L的山梨醇；2%葡萄糖；1.34%YNB；4*10-5%生物素；0.005%氨基酸） 1. 将186g的山梨醇定容至700ml，高压灭菌； 2. 冷却后于45水浴； 3. 将100ml的10*D、100ml的10*YNB；2ml的500*B；10ml的100*AA等母液和88ml无菌水混匀，预热至45后，与步骤2 的山梨醇溶液混合。4保存。 2.8 RDH Regeneration Dextrose Medium + Histidine （葡萄糖再生培养基 + 0.004%组氨酸） 在RD培养基配制的第三步中，在加入10ml的100*H母液，同时无菌水的体积减少至78ml即可，其余配制方法与RD相同。4保存。 2.9 RD及RDH平板的制备 1. 将186g的山梨醇和15-20g琼脂粉定容至700ml，高压灭菌；冷却后于60水浴； 2. 参照RD/RDH液体培养基配制的步骤4，将100ml的10*D、100ml的10*YNB；2ml的500*B；10ml的100*AA等母液、（10ml的100*H母液）和88（78）ml无菌水混匀，预热至45后，与步骤1的山梨醇/琼脂液混匀； 3. 迅速制备平板。4可保存数月。 2.10 RD及RDH 的TOP 琼脂的制备（常用于酵母菌的包被） 1.将186g的山梨醇和 7.5~10g琼脂粉定容至700ml，高压灭菌；冷却后于60水浴； 2.参照RD/RDH液体培养基配制的步骤4，将100ml的10*D、 100ml的10*YNB；2ml的500*B；10ml的100*AA等母液、（10ml的100*H母液）和88（78）ml无菌水混匀，预热至 45后，与步骤1的山梨醇/琼脂液混匀； 3.将该TOP琼脂置于45水浴冷却、保温，备用。 2.11 MD与MDH Minimal Dextrose Medium +（Histidine） 最小葡萄糖培养基 +（ 0.004 %组氨酸） （含有：1.34%YNB；；4*10-5% 生物素；2%葡萄糖） 1. 100ml的10*YNB；2ml的500*B和100ml10*D母液，用800ml的无菌水
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