PCR技术的发展及其在烟草中的应用.pdf

184 CROP RESEARCH 2011, 25(2) PCR 技术的发展及其在烟草中的应用 1 1 1 2,3,* 李 林 ，陈 武 ，周清明 ，黎定军 (1 湖南农业大学农学院，长沙 410128 ；2 湖南农业大学生物安全科技学院，长沙 410128 ； 3 湖南广播电视大学，长沙 410004) 摘 要：PCR 技术是遗传与分子生物学分析的根本性基石，近年来，基于常规 PCR 技术开发出了许多新的用途。 综述了 PCR 技术的主要扩展及其在烟草领域的应用。 关 键 词：PCR 技术；烟草 中图分类号：Q789; S572 文献标识码：A 文章编号：1001-5280(2011)02-0184-05 DOI：10.3969/j.issn.1001-5280.2011.02.24 PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反 20 世纪 90 年代建立，它可以快速地从两个或更多的 应， 是指在 DNA 聚合酶催化下，以母链 DNA 为模 个体组织细胞中分离出差异基因或基因差异表达产 板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延 物，具有简单、灵敏、有效和重复性好等特点。 伸等步骤，体外复制出与母链模板 DNA 互补的子链 1.1.2 AP-PCR 技术的应用 DNA 的过程。现已被广泛应用于农学、植物病理学 AP-PCR技术是常规PCR技术在差异基因分离 等领域的研究。最初的 PCR 技术相当不成熟，但在 方面的扩展，主要应用在：(1)差异基因的分离，Liang 随后的几十年里，PCR 技术被不断改进，它从一种 和Pardee[2]应用AP-PCR技术对正常A31和肿瘤起源 定性的分析方法发展到定量测定；从原先只能扩增 的BPA31细胞进行了鉴定，并分离得到了仅存在于正 几个 kb 的基因到目前已能扩增长达几十个 kb 的 [1] 常细胞的N1及仅存在于肿瘤细胞的T1片段；(2)菌株 DNA 片段 。到目前为止，PCR 技术已有十几种之 鉴定，杨国玲等[3]采用AP-PCR技术对甲真菌病病原 多，本文对其近年来的主要扩展及应用进行综述。 菌进行了快速鉴定；(3)遗传作图，Welsh等[2]成功地 1 PCR技术的扩展 应用AP-PCR方法快速鉴定了重组鼠(C56BL/6J× DBA/2J)扩增多态性在染色体图谱中位置。 1.1 AP-PCR技术 1.2 LP-PCR和彩色 PCR 1.1.1 AP-PCR 技术的定义、来源及特点 AP-PCR(Arbitrarily primed PCR)技术[2] ，是指在对 1.2.1 LP-PCR 和彩色PCR 的定义 所扩增基因顺序一无所知的情况下，主观上随意地 LP-PCR(Labelled primers PCR)，即标记 PCR， 设计或选择一个非特异引物进行