常用western blot 试剂配方.docVIP

Western blot常用试剂配方 1. 丙烯酰胺-双丙烯酰胺储存液：30% AB（100ml） 丙烯酰胺 29 g 双丙烯酰胺 1g 加至100ml，过滤，棕色瓶保存。2. 10% SDS：（10ml） 电泳级SDS 1 g 蒸馏水 9 ml 初始PH约为7.85，用针尖蘸少许浓盐酸调PH 至7.2，定容至10ml。3.TEMED（四甲基乙二胺）（成品） 4. Lower-buffer （1.5M Tris-Cl PH 8.8）：50ml Tris-base 9.085 g 蒸馏水 45 ml 加浓盐酸（约0.4ml）调PH至8.8后定容至50ml，4℃保存。5. upper buffer（1.0M Tris-ClPH 6.8）：50ml Tris-base 6.055 g 蒸馏水 44 ml 加3.5ml浓盐酸调PH至6.8后定容至50ml，4℃保存。6. 10%过硫酸铵（10% AP）：ml 新鲜配制 称取0.g AP于1.5ml EP管中，储存于-20℃，用时溶于ml蒸馏水 7. 5 × loading buffer：（1ml）upper buffer 0.312 ml 15.6ml 甘油（丙三醇）5 ml 25ml SDS 0.1 g 5g DTT 0.0385 g 溴酚蓝g 0.25g 加溶解后定容至1ml。8. 5 × running buffer：（00ml） Tris-base g 甘氨酸（Glycine） g SDS 5 g 加溶解后定容至00ml。 ml蒸馏水。 9. 考马斯亮蓝染液：ml（可重复利用） 甲醇 ml 冰乙酸 ml 蒸馏水 60 ml 考马斯亮-250 5 g 10. 考马斯亮蓝脱色液：现用现配ml 甲醇（30%） 150ml 加定容至00ml。 11. Transbuffer（PH 8.5）：100ml 现用现配 Tris-base3028 g 甘氨酸1.4872 g 甲醇20 ml 加定容至100ml。 12. 10 x 丽春红染液（储存液）：（用时用蒸馏水稀释为1 X 的）染色后用纯水脱色 丽春红???????????????????????? ? 2 g 三氯乙酸????????????????????? ? 30 g 磺基水杨酸???????????????????? 30 g 加H2O? 定容至10 ml（储存液）。4℃保存。1 × TBST洗脱 13. 10 ×TBS：00 ml Tris-base 12.1 g NaCl 40g 加盐酸调PH至7.6，加定容至00ml（储存液）。4℃保存。用时蒸馏水稀释为1 × TBS10 ×储存液，9份水）. 14. 1 × TBST （加Tween的TBS） 洗涤液：Tween含量0.05% 15. 封闭液： 含%脱脂奶粉的TBST 脱脂奶粉g 1 × TBST 20 ml 16. ECL 发光底物：两种溶液1:1混合，均匀涂于膜上。 H202配制 取普通纯水按照每 10ml纯水加入40μl 30% H2O2比例配成新鲜 H2O2 溶液替代ECL溶液B使用