酱曲源毛霉的分离及其产蛋白酶条件的优化.pdfVIP

第27卷 第4期 北京工商大学学报 (自然科学版) Vo1．27No．4 2009年 7月 JournalofBeijingTecbnologyandBusinessUniversity(NaturalScienceEdition) Ju1．2009 文章编号：1671—1513(2009)040001—05 酱 曲源毛霉的分离及其产蛋 白酶条件的优化 任文雅， 廖永红 (北京工商大学 化学与环境工程学院，北京 100048) 摘 要 ：利用稀释平板法从曲样和窖泥单菌落中分离得到 2株毛霉 1#和 2#，在优化的发酵培养 基和发酵条件下产蛋 白酶活力分别达到：1#菌6565u／g，2#菌9146U／g．对两株 菌进行紫外诱 变，获得的诱变U1#菌、U2#菌分别比出发 1#菌、2 菌产蛋 白酶活力提 高了48．58％和54．45％． 关键词：毛霉；分离；紫外诱变；蛋 白酶活力 中图分类号 ：TS201．3 文献标识码 ：A 酱 曲含根霉、毛霉、犁头霉和酵母菌等[1 』多 胨培养基、麦芽汁培养基 6【。j． 种微生物，它们决定了生产工艺和酱类产品的质量． 1．4 毛霉的分离与纯化 微生物在曲块上繁殖时，分泌出各种水解酶，正是这 无菌条件下，将 曲捣碎 ，称取适量样 品，选取适 些酶使酱 曲具有液化、糖化和蛋 白分解等能力_5j． 宜的稀释度用生理盐水稀释，以涂布平板法分别涂 酿造过程中，菌种所分泌的这些酶共同作用于发酵 于马铃薯葡萄糖培养基、察氏培养基、牛肉膏蛋白胨 原料，而最重要 的是蛋白酶和淀粉酶 ．毛霉是活性 培养基、麦芽汁培养基平板上，35℃培养 48h，检查 较强的蛋白酶，采用不同的毛霉菌种制 曲，产物的风 菌落出现情况 ．取单菌落，用接种针挖掘一小块菌 味和营养也不同，对酱类产品的香型和质量也会产 丝移植于另一平板培养基上，35℃培养 72h，再从 生重要影响．本实验对酱 曲中的毛霉进行分离、筛 长有单菌落的平板中选取典型的毛霉菌落，取孢子 选，优化了产蛋白酶的菌株，对酱 曲优势菌群的构 体制成悬液，涂布培养、镜检，重复培养2～3次以分 建、降低生产成本、提高产品品质具有重要意义． 离纯化毛霉 ．将纯化了的毛霉转接到察氏斜面上培 养，待生长完好后置于 4℃冰箱中保存． 1 材料与方法 1．5 产酶培养及其测定 1．5．1 米 曲的制作 1．1 实验材料 取适量大米，洗净浸泡约 14h，水蒸汽蒸30rain 酱曲、窖泥、玉米粉、黄豆粉等． 后分装在锥形瓶 中(每瓶装 8g)，0．1MPa灭菌 30 1．2 主要试剂和仪器 rain．待其冷却至 36℃，分别接入 1mL孢子悬液 福林一酚试剂，其他药品与试剂均为生化试剂或 (菌种来 自分离纯化)，充分混匀，在 35℃恒温培养 分析纯试剂 ． 箱内培养 16～18h，肉眼可见大米上长出了菌丝． T6型新世纪紫外 可见分光光度计 ；DK一$22型 培养 4d后测定蛋 白酶活力 ． 数显恒温水浴锅 ；130s超净工作台；LRH一250型生 1．5．2 酶液浸提 化培养箱 ；AnymicroDss显微镜 ；低温冷冻干燥机 ． 取 5g米曲样品于小烧杯 中，加入 100mL蒸馏 1．3 菌种分离培养基 水，于 40℃水浴 中保温 30min，