10章 菌种选育.docVIP

10章 菌种选育 1.简述诱变育种工作中应注意的问题 A 选择好出发菌株 选好出发菌株对诱变效果有着极其重要的作用。有些微生物比较稳定，其遗传物质耐诱变剂的作用强。如果用这种菌株于生产是很有益的，而用作出发菌株则不适宜。 用作诱变的出发菌株必须对它的产量、形态、生理等方面有相当了解。挑选出发菌株的标准是产量高、对诱变剂的敏感性大、变异幅度广，再确定诱变剂的使用及筛选条件。 B 复合诱变因素的使用 在微生物诱变育种中，可利用各种物理、化学诱变因素来处理菌种。对野生型菌株单诱变因素有时也能取得好的效果，但对老菌种单一诱变因素重复使用突变的效果不高，这时可利用复合因素来扩大诱变幅度，提高诱变效果。 C 剂量选择 各种诱变因素有它们各自的诱变剂量单位，如紫外线剂量单位用焦耳，x一射线剂量单位是库（仑）每千克，中子剂量单位是戈。化学诱变因素一般是以溶液浓度来计算剂量单位的。 对不同微生物使用的剂量是不同的，致死率取决于诱变剂量，而致死率和变异率之间有一定关系。因此可以用致死率作为选择适宜剂量的依据 D 变异菌株的筛选 诱变育种工作的一个主要任务是获得高产变异菌株。从经诱变的大量个体中挑选优良菌种不是一件容易的事。因为不同的菌种表现的变异形式是不同的，一个菌种的变异规律去发现那些与产量有关的特性，并根据这些特性，分门别类地挑选一定数最的典型菌株进行发酵和鉴定，以确定各种类型与产量之间的关系。这样，可大大提高筛选的工作效率 E 高产菌株的获得需要筛选条件的配合 在诱变育种过程中高产菌株的获得还必须有合适的筛选条件的配合，如果忽视这一点，则变异后的高产菌株不可能被挑选出来。 诱变与筛选可以说是一个问题的两个方面，必须用辩证的观点来看待。只重视诱变而忽视筛选，或过份重视菌种而忽视发酵条件的观点都是片面的，这样会影响高产菌株的获得。 总之，在诱变育种过程中要正确处理出发菌株，诱变因素和筛选条件三者的关系。全面辩证地考虑上述三者之间的关系，将是诱变育种能否获得理想效果的重要关 2.概述一种物理诱变剂和一种化学诱变剂的施用方法 A 紫外线 紫外线是一种使用时间较久、值得推广的诱变剂，它的辐射光源便宜，危险性小，诱变效果好，故应用最广泛，研究得也最多。虽然紫外线的波长范围很宽，但对诱变最有效的波长仅仅是260 nm左右（253－265）nm一般诱变时用菌（孢子）悬浮液进行处理，紫外灯的功率为15W，距离固定在30 cm左右。 紫外线的作用机制主要是形成胸腺嘧啶二聚体以改变DNA生物活性，造成菌体死亡和变异。 UV操作步骤：使用UV照射最为方便。取5ml单细胞悬液置于直径6cm的培养皿中，开盖照射； 时间不短于10 ~ 20s，也不长于10 ~20min。 2.使用化学诱变剂的十分简便的方法： ① 平板上涂布出发菌株 ② 在其上分区并放置诱变剂颗粒或沾有诱变剂溶液的小滤纸片 ③ 保温培养 ④ 诱变剂周围有一透明的制菌圈，在制菌圈的边缘存在有若干 突变株的菌落 ⑤ 一一制成菌悬液 ⑥ 分别涂布在琼脂平板表面并保温培养 ⑦ 长成大量单菌落 ⑧ 选出所需突变菌株。 例如：N一甲基一N′硝基一N一亚硝基弧（NTG） 亚硝基胍是亚硝基烷基类化合物的一种，可诱发营养缺陷型突变，不经淘汰便可直接得到12％一80％的营养缺陷型菌株，故有超诱变剂之称。它在pH低于5－5.5的条件下，形成HNO2而引起菌种突变；在碱性条件下以重氮甲烷的形式对DNA起烷化作用；在pH6时，两者均不产生，此时的诱变效应可能是由于NTG本身对核蛋白体引起的变化所致。 在缓冲液中较难溶解，而在甲酰胺中溶解度较大，因此用甲酰胺溶解NTG，可以提高处理浓度。通常在浓度为300 μg／mL，温度为28℃和时间为60分钟的条件下进行处理，容易得到高产菌株。 3.如何选育抗噬菌体菌株 细菌的抗性是基因突变的结果，抗噬菌体突变可以发生在接触噬菌体以前，它和噬菌体的存在与否无关。 A 抗噬菌体菌株选育的几种方法 根据基因突变规律，可采用自然突变和诱发突变等方法获得。 （1）自然突变 以噬菌体为筛子，敏感菌株的孢子不经任何诱变由其自然突变为抗性菌株，这种方法获得的抗性突变频率很低。 2）诱发突变 A 敏感菌株先经诱变因素处理，然后将处理过的孢子液分离在含有高浓度的噬菌体的平板培养基上，经诱变后的存活孢子中，如存在抗性变异菌株就能在此平板上生长。这种菌落生长的速