8 色与谱分离技术.ppt

第八章 色谱分离技术;主要内容; 第一节 色谱分离技术概要; 1931年 Kuhn 和Lederer用氧化铝和碳酸钙分离了?-、?-、?-胡萝卜素 1940年 Martin和Synge提出了液液分配色谱法 1944年 Consden发展了纸色谱法 1949年 Macllean发展了薄层色谱法 1952年 James和Martin发表了完整的气液色谱方法, 获1952年的诺贝尔化学奖 1956年 Van Deemter发展了描述色谱过程的速率理论 1957年 Golay开创了开管柱气相色谱法 60年代末 高压泵和化学键合固定相用于液相色谱法，出现了HPLC 80年代初 毛细管超临界液体色谱发展，毛细管电泳的出现 90年代 结合 HPLC高选择性和CE高效的优点的毛细管电色谱出现; 色谱技术的发展 分离对象： 不限于有色物质 色谱柱： 材料：玻璃、不锈钢、聚四氟乙烯 形状：直形、U形、螺旋形 二维平面形（纸、薄层色谱） 冲洗剂： 液体、气体 填料： 近千种 固体、液体 检测： 眼睛、各种检测器 操作： 手工 全自动 联用技术 ;气相色谱（1952年）;;一、色谱技术的基本概念;;（一）固定相 可以是固体物质（吸附剂，凝胶，离子交换剂），也可以是液体物质（固定在硅胶或纤维素上的溶液） 组成： 空间结构部分：决定固定相尺寸与孔隙率； 化学和生物大分子功能性成分：决定介质与目标溶质特异性相互作用的能力。 P175表8-1; （二）流动相 推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体或超临界流体。 柱色谱中称为洗脱剂，薄层色谱中称为展开剂。;正相色谱 是指固定相的极性高于流动相的极性。非极性分子或极性小的分子比极性大的分子移动速度快，先从柱中流出来。 反相色谱 是指固定相的极性低于流动相的极性，在这种色谱过程中，极性大的分子比极性小的分子移动速度快而先从柱中流出。 分离纯化极性大的分子，采用正相色谱；分离纯化极性小的有机分子，采用反相色谱。;（三）分配系数，分配比和选择因子 1、分配系数：在一定条件下，某种组分在固定相和流动相中含量（浓度）的比值。它是色谱中分离纯化物质的主要依据。langmuir 无论色谱分离的机理如何，当溶质浓度较低时，固定相浓度和流动相浓度成线性的平衡关系。 ;影响因素： 1、被分离物质本身的性质。K越大，出峰越慢，K＝0时，最先流出。 2、固定相和流动相的性质 3、色谱柱的温度 温度升高20℃，K下降一半，常用恒温柱; 在实际工作中另一表征色谱分配过程的参数。 是指在一定温度、压力下，在两相间达到分配平衡时，组分在两相间的质量比，用k来表示：; （1）分配系数是组分在两相间分配达到平衡时的浓度之比，分配比则是组分在两相间的分配总量之比。;3. 选择因子? 色谱柱对A、B两组分的选择因子? 定义如下： ;K 或 k 反映的是某一组分在两相间的分配； ? 是反映两组分间的分离情况。 两组分 K 或 k 相同时，? =1 时，两组分不能分开； 两组分 K 或 k 相差越大时，? 离1越远，分离得越好。 两组分在两相间的分配系数不同，是色谱分离的先决条件。 ? 和 k 是计算色谱柱分离效能的重要参数！ ; （四）阻滞因素(迁移率) 指在一定条件下，在相同的时间内某一组分在固定相移动的距离与流动相本身移动的距离之比值。小于1 Rf=溶质的移动速度/流动相的移动速度 Rf=溶质的移动距离/溶剂前沿（纸层析） 相对迁移率：指在一定条件下，在相同时间内，某一组分在固定相中移动的距离与某一标准物质在固定相中移动的距离之比值。;（五）检测方法 目标：灵敏度，线性度，重现性，可在线操作 在线检测方法： （P180表8-2） 吸光度、化学发光、电化学、电导率、荧光、红外吸收光谱、折射率、质谱等。;二、 色谱的理论基础;（一） 色谱图的特征值;1. 基线 当色谱柱没有组分进入检测器时，在实验操作条件下，反映检测器系统噪声随时间变化的线称为基线。它的平直与否可反应出实验条件的稳定情况。稳定的基线是一条直线。 基线漂移：指基线随时间定向的缓慢变化。 基线噪声：指各种噪声所引起的基线起伏（波动）。; 2、峰高（h）和峰面积 色谱峰顶点与基线的距离叫峰高。